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プロフェッショナルでコスト削減のソリューション

顧客提供のテンプレートからの突然変異誘発

クリエイティブ酵素 提供する 顧客提供のテンプレートからの突然変異誘発私たちのコアオファリングの一部である、 サイト特異的変異導入(SDM)サービスこのサービスは、すでに検証済みのプラスミドDNAまたは発現構築物を持ち、ターゲットミューテーションを精度と信頼性を持って導入したいクライアントのために設計されています。構造-機能関係を調査したり、触媒性能を向上させたり、酵素の安定性を微調整したりすることを目指す場合でも、私たちは高忠実度の方法論と厳格な品質管理を通じて正確な突然変異結果を提供します。私たちのプラットフォームは、科学的相談、最適化された反応設計、配列確認を統合しており、各突然変異が指定通りに正確であることを保証します。これにより、下流の発現、特性評価、またはスクリーニングの準備が整います。

顧客提供のテンプレートからの突然変異誘発の紹介

酵素工学と機能ゲノミクスにおいて、 サイト指向変異導入法 タンパク質の特性を調査し向上させるための最も強力なツールの一つであり続けています。しかし、クライアントが独自の発現ベクターを提供しても、信頼性が高く再現性のある変異を達成するには、技術的な精度と徹底的な検証が必要です。

従来のラボ内変異誘発法は、プライマー設計の不完全さ、PCR増幅の効率の低さ、プラスミドの不安定性、オフターゲット変異などの落とし穴に直面することがよくあります。Creative Enzymesでは、最適化されたプロトコル、自動反応システム、厳格な品質管理基準を活用して、これらの課題を克服しています。

組み合わせることによって クライアント提供のテンプレート 私たちの 変異原性の専門知識私たちは、優れた精度で単一サイトまたは複数サイトの変異体を迅速に生成することを可能にします。テンプレートの検証から最終的な配列確認までのエンドツーエンドのワークフローにより、提供されるすべての構造物の完全性に高い信頼性が確保されます。

Mutagenesis service using customer templates

私たちの提供内容

顧客提供のテンプレートを使用した高精度の突然変異サービスを提供しており、以下の機能を提供しています:

クライアント提供のテンプレートを使用した突然変異誘発

お客様が提供したプラスミドやDNA構造体に直接変異導入を行い、ベクターバックボーンとクローンコンテキストを保持します。

単一および複数サイト突然変異誘発

クライアントの仕様に従った1つまたは複数のターゲット変異(置換、挿入、欠失)の導入。

変異導入前のテンプレート検証

修正前に提供されたプラスミドのオプションの事前スクリーニングおよび配列確認を行い、正確性を確保します。

柔軟な方法選択

構造の複雑さに応じたPCRベース、組換え駆動、またはオリゴヌクレオチド指向の戦略の使用。

完全変異検証

変異導入後の完全なオープンリーディングフレームシーケンシングと制限酵素消化による検証。

ライブラリ構築オプション

酵素最適化プロジェクトのための組み合わせまたは飽和変異ライブラリの生成。

ベクトルメンテナンス

元のプラスミドバックボーン、プロモーター、および選択マーカーは完全に保持されています。

迅速な配達

検証済みの変異体構築物には、配列解析報告書、ベクターマップ、および変異確認証明書が付属しています。

サービスワークフロー

Service workflow for site-directed mutagenesis using customer-provided templates

サービスの詳細

パラメータ 仕様
変異タイプ 点変異、挿入、欠失、または組み合わせ変異
テンプレート要件 精製されたプラスミドDNAまたは確認済みベクター構築物(≥50 ng/µL)
ベクトルの互換性 すべての標準クローンおよび発現ベクター(細菌、酵母、昆虫、哺乳類)
検証方法 フルレングスサンガーシーケンシング
ターンアラウンドタイム 複雑さに応じて7~15営業日
納品物 検証済みプラスミド(≥2 µg)、配列報告書、ベクターマップ、QC文書
オプションの追加機能 発現テスト、タンパク質精製、または変異ライブラリの拡張

サービスの接続

このサービスは、私たちの兄弟サービスを補完します。

これら2つのサービスは、私たちの基盤を形成しています。 コア部位特異的変異導入サービス研究および産業のニーズに対して完全な柔軟性を提供します。独自のベクターを提供する場合でも、完全に統合された合成から変異までのワークフローをリクエストする場合でも、すべてのプロジェクトに対して正確で再現性があり、高品質な結果を保証します。

問い合わせ

なぜ私たちを選ぶのか

あなたの構造物の精度

提供されたプラスミドに直接取り組み、ベクターの構成と実験の文脈を完全に制御します。

柔軟な変異オプション

研究目標に応じた単一、複数、および組み合わせ変異のサポート。

高度な方法論

高忠実度PCRおよび組換えベースのアプローチの利用は、望ましくない変異を最小限に抑えます。

迅速な対応

最適化されたワークフローは、品質を損なうことなくプロジェクトの時間を短縮します。

包括的な検証

すべての修正された構造は完全に配列されており、設計との正確な対応が保証されています。

機密性と知的財産の保護

すべてのクライアントのシーケンスとデータは、厳格な機密保持契約の下で取り扱われます。

代表的なケーススタディ

ケース1:補因子の好みを高めるための単一ポイント変異

クライアントのニーズ:

代謝工学の研究グループは、バイオ合成生産システムにおける経路効率を向上させるために、重要な酸化還元酵素の補因子特異性をNADHからNADPHに変更しようとしました。既存のにもかかわらず、 大腸菌 発現ベクター、彼らの以前の変異誘発試験は低い再現性と背景プラスミドの汚染に悩まされていました。

私たちのアプローチ:

クライアントは、検証済みのpET-28a(+)-ベースの構造体を提供し、Creative Enzymesで初期プラスミドの完全性評価を行いました。高忠実度PCRベースのサイト特異的変異導入法を使用して、補因子結合に影響を与えることが知られている残基において、単一のアミノ酸置換(D199S)を導入しました。変異プラスミドは、正しい変異の存在と二次的エラーの不在を確認するために完全に配列決定され、その後、発現試験のために納品されました。

結果:

エンジニアリングされた酸化還元酵素は、NADPHに対する触媒効率が6倍向上し、NADH活性も維持しました。突然変異設計から確認されたプラスミドの配達まで、プロジェクト全体は2週間以内に完了し、クライアントは迅速に動力学的および構造的分析を進めることができました。

ケース2:酵素安定性を向上させるための多地点変異導入

クライアントのニーズ:

産業用酵素メーカーは、連続生産システムにおける高温バイオ触媒に適した熱安定性リパーゼ変異体を必要としていました。目標は、製品開発を遅らせていた時間のかかる段階的突然変異アプローチを避けながら、同時に4つの安定化置換を導入することでした。

私たちのアプローチ:

クライアントの独自のリパーゼプラスミドを受け取った後、我々は平行オリゴヌクレオチド指向変異導入のために4つのターゲットプライマーを設計しました。最適化されたマルチサイト変異導入ワークフローを使用して、すべての置換は単一の増幅およびリガーションのラウンドで導入されました。完全な構造体は、正確な変異の組み込みとプラスミドの完全性を保証するためにフルレングスシーケンシングを受けました。

結果:

得られたリパーゼ変異体は、野生型と比較して融解温度(Tm)が9°C上昇し、元の触媒回転数と基質特異性を維持しました。一段階で確認されたワークフローは、複数のクローニングおよび検証ラウンドを排除し、プロジェクトのタイムラインを約40%短縮し、さらなる産業用酵素開発のための堅牢なテンプレートを提供しました。

よくある質問

  • テンプレートを提出するための要件は何ですか?

    A: 精製されたプラスミドDNA(>50 ng/µL)を提供してください。また、可能であれば、全配列とベクターマップもお願いします。これにより、最適なプライマー設計と正確な変異ターゲティングが保証されます。
  • Q: 変異導入を行う前に提供されたテンプレートを確認しますか?

    A: はい、進む前に提供された構造をオプションで配列決定することができます。このステップは、既存の変異が望ましい修正に干渉しないことを保証します。
  • Q: プラスミドが大きい場合や繰り返し領域を含む場合はどうなりますか?

    A: 我々は20 kbまでの複雑なプラスミドの経験があり、高GCまたは繰り返し配列に合わせてプロトコルを調整できます。
  • Q: 一度のラウンドで複数のサイト変異を行うことはできますか?

    A: はい。私たちの独自のマルチプレックスSDM法は、複数の変異を同時に導入できるため、クローニングのステップを最小限に抑えます。
  • Q: クライアントが提供したDNAの機密性をどのように確保していますか?

    A: すべてのクライアント資料は、厳格な機密保持および非開示契約の下で処理され、安全なデータ管理および廃棄プロトコルが適用されます。
  • Q: 突然変異後の下流のタンパク質発現に関して手伝ってもらえますか?

    A: はい。クリエイティブエンザイムズはオプションを提供しています。 ダウンストリームサービス タンパク質発現、精製、および機能アッセイを含む、酵素工学のワークフローを加速させるための。

研究および産業用途にのみご使用ください。個人医療用途には適していません。一部の食品グレード製品は、食品および関連用途における処方開発に適しています。

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