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プロフェッショナルでコスト削減のソリューション

クリエイティブ酵素合成テンプレートからの突然変異誘発

クリエイティブ酵素 オファー 合成テンプレートからの突然変異誘発私たちの専門サービスの一部である、 コアサイト特異的変異導入(SDM)ポートフォリオ研究者に遺伝子合成から突然変異誘発までのシームレスで完全に統合されたワークフローを提供するように設計されています。内部で合成され、配列が確認されたDNAテンプレートを使用することで、テンプレートの品質、クローニングの不一致、または背景変異に関連する不確実性を排除します。これにより、下流の酵素工学、機能スクリーニング、およびタンパク質最適化研究において最大限の精度、再現性、および効率が確保されます。当社のプラットフォームは、自動化された遺伝子合成、高度な突然変異誘発技術、および包括的な品質管理を組み合わせており、発現と分析のために正確に設計された構造物を提供します。

創造的酵素合成突然変異テンプレートの紹介

中で 酵素工学テンプレートの品質は基盤です。 成功した変異誘発の。わずかな配列エラー、二次構造の問題、またはクローニングアーティファクトでさえ、PCRベースまたは組換えベースの効率を損なう可能性があります。 SDMワークフロー従来のアプローチは、第三者または自己準備したプラスミドに依存しているため、しばしば変動する完全性や不完全な配列検証に悩まされ、時間の無駄や一貫性のない実験結果を招くことがあります。

これらの課題に対処するために、Creative Enzymesはカスタム遺伝子合成、ベクター最適化、変異導入工学における専門知識を活用した合成から変異までのパイプラインを開発しました。社内で合成された完全に検証されたコドン最適化遺伝子を基に、直接的な標的変異導入を行い、すべての構築物がエラーフリーで高品質なテンプレートに基づいていることを保証します。この統合プロセスにより、変異導入の成功率が大幅に向上し、ターンアラウンドタイムが短縮され、クライアントに対してエンジニアリングされた酵素の完全なトレーサビリティと信頼を提供します。

Mutagenesis service using templates synthesized by Creative Enzymes

私たちの提供内容

私たちは、Creative Enzymesが合成したテンプレートを使用した高精度の突然変異サービスを提供しており、以下の機能を提供しています:

統合合成から突然変異誘発までのワークフロー

内部合成された、配列確認済みのDNAテンプレートに対して直接変異導入を行い、顧客提供のプラスミドを必要としない。

単一および複数サイト変異導入

コーディング領域または調節領域内での1つ以上の正確な変異(置換、欠失、または挿入)の導入。

発現ホストのためのコドン最適化

発現のために合成および最適化された遺伝子配列 大腸菌バチルス変異原処理の前に、酵母、昆虫、または哺乳類システム。

柔軟なベクター選択

ターゲット酵素および実験デザインに最適な発現ベクターにクローン化されたテンプレート。

高忠実度突然変異法

PCRベースのアプローチ、組換え、または精度とオフターゲット修飾の最小化に最適化されたオリゴヌクレオチド指向のアプローチの使用。

包括的な検証

すべての構築物は、変異の忠実性を確保するために、フルレングスのサンガーシーケンシングと制限酵素解析によって確認されています。

バリアントライブラリの構築

酵素バリアントスクリーニングのためのオプショナルな組み合わせまたはサイト飽和変異導入。

迅速な対応と納品

シーケンシングレポート、変異確認、ベクターマップを添付した、使用準備完了のプラスミド。

サービスワークフロー

Service workflow for site-directed mutagenesis using templates synthesized by Creative Enzymes

サービスの詳細

パラメーター 仕様
変異の種類 置換、挿入、削除、または組み合わせ変異
サポートされている遺伝子の長さ 最大10KB(リクエストに応じて長くすることも可能)
ベクターシステムズ 細菌、酵母、昆虫、または哺乳類宿主に対応した標準およびカスタム発現ベクター
検証方法 フルレングスサンガーシーケンシングと制限酵素消化
ターンアラウンドタイム 10~20営業日(複雑さに応じて)
成果物 検証済みプラスミドDNA(≥2 µg)、ベクターマップ、配列確認報告書
オプションの追加機能 ライブラリ構築、発現テスト、タンパク質精製サービス

サービスの接続

私たちのクリエイティブエンザイムによる変異誘発合成テンプレートサービスは、姉妹サービスと並行して運営されています:

両方のサービスは私たちの核心を形成しています。 コアサイト指向変異導入サービスプロジェクトのニーズやテンプレートの可用性に基づいて柔軟性を提供します。ターンキーの合成から変異サポートが必要な場合でも、既存の構造物のターゲット修正が必要な場合でも、私たちは酵素工学と発見を加速するための正確で検証された結果を提供します。

問い合わせ

なぜ私たちを選ぶのか

完全統合ワークフロー

合成から突然変異誘発まで、すべてのステップが一つの屋根の下で行われ、ベンダー間の変動が排除されます。

保証されたテンプレートの整合性

Creative Enzymesによって合成されたすべての遺伝子は、完全な配列検証を受けており、背景変異はゼロであることが保証されています。

高い変異精度

独自の高忠実度変異導入プラットフォームは、不要な変化を伴わずに、正確な単一または複数の部位変更を保証します。

広範なホスト互換性

コドン最適化とベクターデザインの調整 大腸菌バチルスピチア・パストリス昆虫、または哺乳類のシステム。

包括的な品質管理

配列決定、制限地図作成、および実験的トレーサビリティを通じた多段階検証。

時間を節約し、コスト効率が良い

統合サービスは、取り扱いステップを最小限に抑え、プレミアム品質基準を維持しながら、リードタイムを短縮します。

ケーススタディと成功事例

ケース1:合成テンプレートからの単一サイト変異導入による酵素触媒効率の向上

クライアントのニーズ:

穀物処理に使用されるβ-キシラナーゼ酵素の低温触媒活性を向上させることを目的とした食品バイオテクノロジー企業がありました。しかし、内部で調製したプラスミドを使用した以前の突然変異誘発試験は、テンプレートの不純物や配列決定エラーのために一貫性のない結果を生み出し、酵素の最適化に向けた進展を遅らせていました。

私たちのアプローチ:

我々は、完全に検証されたコドン最適化された遺伝子テンプレートを合成しました。 大腸菌 クライアントのネイティブ配列に基づく発現。厳格な品質管理の後、活性部位の柔軟性と基質親和性を向上させると予測されたA184Y置換を導入するために、精密な部位特異的変異導入を行いました。確認された変異体は、その後、発現ベクターにクローニングされ、使用準備が整った構築物として提供されました。

結果:

設計されたβ-キシラナーゼ変異体は、野生型と比較して触媒効率が2.7倍向上し、融解温度が4℃上昇しました。シームレスな合成から変異誘発までのワークフローは、わずか3週間未満で完了し、クライアントの酵素工学プログラムを大幅に加速させました。

ケース2:熱安定性向上のための合成テンプレートからの組換え変異原性

クライアントのニーズ:

産業用酵素メーカーは、高温でのバイオ触媒合成に使用するために、ラクトナーゼ酵素の熱安定性を向上させることを目指しました。このプロジェクトでは、5つの触媒ループ残基で同時に置換を行う必要がありましたが、従来の段階的変異導入法は手間がかかり、エラーが発生しやすく、厳しい生産期限に適していませんでした。

私たちのアプローチ:

クライアントのために事前最適化されたエラーフリーのラクトナーゼテンプレートを生成するために、モジュラー遺伝子合成戦略を採用しました。 バチルス 発現系。我々は5つの変異特異的プライマーを設計し、検証した後、高忠実度PCRプラットフォームを使用して平行組み合わせ変異導入を行いました。各構築物は配列確認を受け、スクリーニングのために準備されたキュレーションされたミニライブラリとして提供されました。

結果:

4つの変異体は熱安定性において顕著な改善を示し、最も優れたバリアントは触媒の回転率を損なうことなく、融解温度(Tm)が7.5 °C上昇しました。統合された合成テンプレートと突然変異誘発のワークフローは、プロジェクト全体の時間を60%短縮し、将来の複数サイト最適化努力のためのスケーラブルな道を提供しました。

よくある質問

  • Q: なぜ自分のテンプレートを提供するのではなく、Creative Enzymesが合成したテンプレートを使用すべきですか?

    内部合成されたテンプレートは、完全に配列確認され、コドン最適化されており、バックグラウンド変異がないため、突然変異生成結果の成功率と一貫性が大幅に向上します。
  • 複数の変異を同時に導入できますか?

    A: はい。私たちはサイト飽和変異導入と組み合わせ変異導入の両方を行い、1つの構造内で複数の残基を同時に修飾することができます。
  • Q: どのような発現系がサポートされていますか?

    A: 私たちは細菌をサポートします(大腸菌バチルス), 酵母 (ピチア・パストリス), 昆虫(Sf9、Sf21)および哺乳類発現系。ベクターの選択とコドン最適化はそれに応じてカスタマイズされます。
  • Q: 突然変異の精度はどのように確認されますか?

    A: すべての構築物はオープンリーディングフレームの完全なサンガーシーケンシングを受け、目的の変異が存在し、オフターゲットの変化がないことを確認します。
  • Q: 突然変異後に追加の下流サービスをリクエストできますか?

    A: もちろんです。私たちは、完全な酵素工学ソリューションのために、発現テスト、タンパク質精製、活性アッセイ、安定性特性評価をオプションの下流サービスとして提供しています。
  • Q: 私の遺伝子配列が特に長い場合や繰り返しが含まれている場合はどうなりますか?

    A: 当社の遺伝子合成技術は、最大10 kb(リクエストに応じてそれ以上)までの配列に対応しています。高GC含量や繰り返しを含む複雑な構造体には、忠実性を維持するために特別なアセンブリプロトコルを使用しています。

研究および産業用途にのみご使用ください。個人医療用途には適していません。一部の食品グレード製品は、食品および関連用途における処方開発に適しています。

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