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転移酵素の酵素活性測定

トランスフェラーゼ(転移酵素)は、分子間で官能基を転移させる反応を触媒する重要な酵素群であり、代謝から生合成に至る幅広い生物学的プロセスを駆動します。トランスフェラーゼの活性を正確に測定することは、その機能解明、産業用途の最適化、ならびに酵素工学の高度化に不可欠です。Creative Enzymesは、トランスフェラーゼを対象とした信頼性が高く、精度に優れ、かつカスタマイズ可能な酵素活性測定サービスを提供し、研究および応用プロジェクトの双方を支える高品質データと専門的知見をご提供します。

トランスフェラーゼの酵素活性測定が重要である理由

トランスフェラーゼは、アミノ基、リン酸基、メチル基、グリコシル基、アシル基などの官能基を、ある基質(ドナー)から別の基質(アクセプター)へ転移させます。これらの酵素は、エネルギー代謝、シグナル伝達、タンパク質修飾、薬物代謝といった生化学的経路において不可欠です。機能が高度に特異的であることが多いため、トランスフェラーゼ活性の測定には、基質の慎重な選定、アッセイ条件の最適化、ならびに厳密なデータ解析が求められます。

トランスフェラーゼ活性測定の主な用途は以下のとおりです:

  • 創薬および薬理学的研究
  • 酵素工学および指向性進化
  • 化学・製薬産業におけるバイオカタリシス
  • 代謝経路工学および合成生物学

包括的なサービス内容

サービスの流れ

ステップ 手順 詳細
1 酵素調製
  • 一貫した活性を担保するため、酵素サンプルを慎重に精製します。
  • 天然由来および組換えトランスフェラーゼの双方に対応します。
2 基質選定
  • 適切なドナー基質およびアクセプター基質の同定・妥当性確認を実施します。
  • 生理学的妥当性、安定性、特異性を考慮します。
3 アッセイ開発
  • お客様の対象酵素に合わせたカスタムアッセイを設計します。
  • 複数のアッセイ形式に対応:
    • 吸光度ベースでモニタリングする分光光度法アッセイ
    • 高感度・高スループットに適した蛍光アッセイ
    • (適用可能な場合)官能基転移を精密に追跡する放射性同位体(RI)アッセイ
4 酵素活性の決定
  • 官能基転移反応をリアルタイムでモニタリングします。
  • 再現性を保証するため、厳格なコントロールを適用します。
5 データ解析およびレポーティング
  • 包括的な速度論データおよび活性データを提供します。
  • 酵素効率、基質特異性、作用機序に関する示唆を含め、専門家が結果を解釈します。

トランスフェラーゼ活性測定の専門サービス

研究および産業用途に対して、より的確な支援を提供するため、Creative Enzymesはトランスフェラーゼファミリー内の専門サービスを用意しています。各サービスは、最適化されたアッセイ系と、各サブクラス特有の活性を捉えるためのカスタマイズワークフローに基づいて設計されています。

Structure of Saccharomyces cerevisiae RNA polymerase II
リン転移酵素(Phosphorus Transferases)の酵素活性測定
キナーゼおよびホスホトランスフェラーゼを含むリン転移酵素は、エネルギー代謝およびシグナル伝達の中核を担います。当社サービスでは、分光光度法や蛍光法などの高感度アッセイを用いて、リン酸基転移を正確に定量します。これらの測定により、酵素速度論、基質特異性、調節機構に関する知見が得られ、創薬、代謝工学、合成生物学における応用を支援します。
Structure of human adenine phosphoribosyltransferase (APRTase) dimer in complex with phosphoribosyl pyrophosphate, adenine and ribose 5-phosphate
グリコシル/ヘキソシル/ペントシル転移酵素の酵素活性測定
本サービスは、糖鎖付加(グリコシル化)、多糖生合成、糖質代謝に必須となる糖基転移反応を触媒する酵素に焦点を当てています。高精度に転移酵素活性を測定するためのカスタムアッセイを開発し、酵素効率、糖ドナー特異性、反応速度に関する重要情報を明らかにします。得られた結果は、製薬研究、産業用バイオカタリシス、糖鎖生物学研究に有用です。

お問い合わせ

Creative Enzymesが選ばれる理由

包括的な専門性

トランスフェラーゼ生物学および酵素速度論に関する深い知見。

最先端技術

高度な検出プラットフォームを活用し、信頼性と高感度を両立した結果を提供。

最適化されたソリューション

多様な研究・産業ニーズに対応するカスタムアッセイとワークフロー。

高品質データ

厳格な手順、品質管理、再現性を保証。

機密保持と信頼性

お客様の知的財産およびプロジェクトデータを強固に保護。

迅速な納品

効率的なプロジェクト管理により、タイムリーに結果を提供。

ケーススタディおよび実用例

ケース1:Myxococcus xanthus由来 polyP:AMP ホスホトランスフェラーゼの触媒活性プロファイル

Myxococcus xanthusは飢餓条件下でポリリン酸(polyP)を産生し、ポリリン酸キナーゼ(Ppk)が子実体形成を駆動します。本研究では、クラスII Ppk2酵素である polyP:AMP ホスホトランスフェラーゼ(Pap)を特性解析しました。Pap活性はMn2+/Mg2+により増強され、長鎖polyPに対して高い親和性を示す一方、polyP60–70で最大の触媒効率を示しました。興味深いことに、PapはAMPからADPおよびATPを逐次的に生成し、追加の polyP:ADP ホスホトランスフェラーゼ活性も示しました。飢餓によりPap活性は2.3~2.4倍に増加し、組換えPapはPpk1またはアデニル酸キナーゼ(AdkA)と協働して、AMP、ADPおよびpolyPからATPを産生しました。これらの知見は、栄養制限下におけるエネルギー再生においてPapが重要な役割を担うことを示しています。

Enzyme activity of polyphosphate kinase under different reaction conditions図1.反応条件がPap活性に及ぼす影響。(A–C)pH(A)、温度(B)、金属イオン(C)がPapによるADP合成に及ぼす影響。これらの反応はMaterials and methodsに記載のとおり実施した。データは、pH 8.0(A)、50 ℃(B)、または5 mM Mn2+存在下(C)でのPap活性を100%とした相対活性(%)として示した。(D)Papの基質特異性。(Kimura and Kamatani, 2021)

ケース2:YM155はNleBおよびSseKのアルギニン・グリコシルトランスフェラーゼ活性を阻害する

III型分泌装置エフェクターであるNleBおよびSseKは、タンパク質基質のアルギニン残基を修飾するグリコシルトランスフェラーゼです。42,498化合物のハイスループットスクリーニングにより、YM155(sepantronium bromide)が、E. coli NleB1、Citrobacter rodentium NleB、およびSalmonella enterica SseK1/2の阻害剤として同定されました。YM155は哺乳類細胞に対する毒性を示さず、宿主のO結合型N-アセチルグルコサミン転移酵素との交差反応性も認められませんでした。細胞アッセイでは、YM155は細菌増殖に影響を与えることなく、マウスマクロファージ様細胞におけるSalmonellaの生存を低下させました。これらの結果は、YM155が選択的な抗病原性(anti-virulence)剤として、また腸管病原体におけるNleB/SseK媒介グリコシル化を研究するための作用機序解析プローブとして有望であることを示しています。

NleB1 inhibitor screening図2.一次スクリーニング結果。(A)NleB1阻害アッセイにおける全プレートのZ'スコア分布。平均Z'スコアは0.77 ± 0.08であった。(B)ハイスループットスクリーニング(HTS)結果。(Zhu et al., 2021)

よくあるご質問(FAQ)

  • Q:どのような種類のトランスフェラーゼを測定できますか?

    A:グリコシルトランスフェラーゼ、キナーゼ、メチルトランスフェラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、アミノトランスフェラーゼなど、トランスフェラーゼの全サブクラスに対応しています。
  • Q:活性測定にはどのようなアッセイ形式を提供していますか?

    A:酵素種およびプロジェクト要件に応じて、分光光度法、蛍光法、電気化学法、または放射性同位体(RI)アッセイを用います。
  • Q:粗抽出液での活性測定は可能ですか?精製は必須ですか?

    A:いずれも対応可能です。高精度測定には精製を推奨しますが、必要に応じて粗抽出液または部分精製酵素調製物に適したアッセイ設計も可能です。
  • Q:一般的なプロジェクト期間はどのくらいですか?

    A:アッセイの複雑性および酵素種に依存しますが、多くのトランスフェラーゼ活性測定プロジェクトは2~4週間で完了します。
  • Q:活性測定に加えて、速度論解析(Km、Vmaxなど)も提供していますか?

    A:はい。Km、Vmax、ターンオーバー数(kcat)に加え、ご要望に応じて阻害試験を含む包括的な速度論プロファイリングを提供します。
  • Q:他の酵素種についても酵素活性測定サービスはありますか?

    A:はい。トランスフェラーゼに加え、酸化還元酵素、加水分解酵素、リアーゼ、異性化酵素、リガーゼなど、主要な酵素クラス全般を対象とした包括的な活性測定サービスを提供しています。

参考文献:

  1. Kimura Y, Kamatani S. Catalytic activity profile of polyP:AMP phosphotransferase from Myxococcus xanthus. Journal of Bioscience and Bioengineering. 2021;131(2):147-152. doi:10.1016/j.jbiosc.2020.09.016
  2. Zhu C, El Qaidi S, McDonald P, Roy A, Hardwidge PR. Ym155 inhibits NleB and SseK arginine glycosyltransferase activity. Pathogens. 2021;10(2):253. doi:10.3390/pathogens10020253

研究および産業用途にのみご使用ください。個人医療用途には適していません。一部の食品グレード製品は、食品および関連用途における処方開発に適しています。

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