サービス

プロフェッショナルでコスト削減のソリューション

コアサイト特異的変異導入サービス

クリエイティブ酵素 提供する コアサイト特異的変異導入(SDM)サービスターゲット変異をDNA配列に正確かつ信頼性高く導入し、酵素の特性を修正するサービスを提供しています。私たちのサービスは、クライアントが提供するテンプレートとCreative Enzymesによって合成された構造の両方に対応するように設計されています。高度な突然変異導入手法と厳格な品質管理を組み合わせることで、研究者や産業パートナーが酵素の機能を調査し、触媒活性を最適化し、新しいバイオ触媒を生成できるようにします。私たちのサービスポートフォリオは、迅速で正確かつ再現性のある結果を保証し、酵素工学のワークフローの中心を形成しています。

サイト特異的変異導入の重要性

サイト指向変異導入法 タンパク質工学の基盤であり、特定のアミノ酸の変化を通じて構造-機能関係を探ることや酵素特性を向上させることを可能にします。信頼性の高い突然変異結果を達成するためには、高品質のテンプレート、正確な設計、および変異の厳密な検証が必要です。この段階でのエラーは、時間やリソースの無駄遣い、あいまいな結果につながる可能性があります。

Creative EnzymesのコアSDMサービスは、合成されたテンプレートとクライアント提供のテンプレートの両方から専門的な突然変異実行を提供することで、これらの課題に対処します。私たちのチームは、豊富な経験、合理的な設計戦略、および高度な実験技術を組み合わせて、下流の発現および特性評価に適した突然変異準備が整った構造体を提供します。

Step-by-step site-directed mutagenesis enzyme engineering services at Creative Enzymes

私たちの提供内容

クリエイティブエンザイムズは包括的なサービスを提供します。 コア部位特異的突然変異導入(SDM)サービス 正確で再現性のある遺伝子改変を達成するために設計されています。酵素活性の向上、基質特異性の変更、触媒メカニズムの研究、または熱安定性の向上が目的であっても、私たちのサービスはターゲット変異を生成するための完全にカスタマイズ可能で品質保証されたプラットフォームを提供します。

サービス クリエイティブ酵素合成テンプレートからの突然変異誘発
Site-directed mutagenesis using Creative Enzymes-synthesized templates
顧客提供のテンプレートからの変異原生産
Site-directed mutagenesis using customer-provided DNA templates
サービスの適用性 完全なターンキーソリューションを好むクライアントのために、Creative Enzymesは内部合成された変異準備完了の遺伝子テンプレートを使用した変異導入を提供しています。これらのテンプレートは、最適なパフォーマンスと変異導入ワークフローとの互換性を確保するために、当社の専門家によって設計および検証されています。 クライアントがすでにクローンDNAテンプレートを持っている場合、Creative Enzymesは顧客提供のプラスミドまたはPCR産物を使用したプロフェッショナルな突然変異実行を提供します。私たちの技術チームは、突然変異の設計と実施を開始する前に、テンプレートの完全性と互換性を慎重に評価します。
作業範囲 私たちのサービスは、テンプレート合成やプライマー設計から変異導入および検証までのすべてのステップをカバーし、構築物が正確で発現準備が整い、完全に検証されていることを保証します。このオプションは、テンプレートエラーのリスクを最小限に抑え、全体のプロジェクトタイムラインを加速します。 プライマー設計から変異検証まで、完全なカスタマイズを提供し、社内テンプレートと同じレベルの精度と信頼性を確保しています。このオプションは、柔軟性とコスト効率を提供しながら、精度へのコミットメントを維持します。
主な特徴
  • コドン最適化され、配列確認されたテンプレートは、ターゲットホストでの高い発現のために設計されています。大腸菌酵母、昆虫、または哺乳類のシステム)。
  • 高度なポリメラーゼとエラーフリークローニング技術を用いた高忠実度変異導入。
  • 柔軟な変異形式:単一部位、多部位、飽和変異導入。
  • 完全な変異後シーケンシング確認とデータ報告。
  • 下流クローン作成、発現、および特性評価サービスに対応しています。
  • クライアント提供のプラスミドまたは線状DNAテンプレートの品質確認後の受け入れ。
  • 効率性と特異性に最適化されたプロフェッショナルプライマー設計。
  • 複数の突然変異戦略のサポート:単一ヌクレオチドの変化、挿入、欠失、または組み合わせ突然変異。
  • すべての最終構造物のシーケンシングに基づく検証と完全性分析。
  • 必要に応じて、下流の研究のために代替発現ベクターへの再クローン化をオプションとします。
利点 このサービスは、特に大規模または高い複雑性を持つ酵素工学プログラムにおいて、最大の精度、速度、便利さを求めるクライアントに最適です。 このサービスは、既存のクローンベクターや独自の構造を持つクライアントに特に適しており、追加の合成ステップなしで専門的かつ高精度な変異導入を必要としています。

問い合わせ

サービスワークフロー

Workflow diagram of core site-directed mutagenesis

サポートされている変異タイプとその応用

私たちのSDMプラットフォームは、以下を含むさまざまな変異戦略と実験目標の全範囲をサポートしています。

  • 単一サイト変異導入特定の残基の置換による機能または触媒の重要性の評価
  • マルチサイト突然変異誘発法複数の変異を同時に導入して、相乗効果や累積的変化を研究する
  • 飽和突然変異誘発法残基の体系的な置換による配列-機能のランドスケープの探求
  • 挿入/欠失変異誘発酵素のループ、リンカー、または構造モチーフを修正するために
  • 組合せ突然変異法指向性進化またはスクリーニング研究のためのバリアントライブラリの作成

アプリケーションには次のものが含まれます:

  • 酵素活性と特異性の最適化
  • タンパク質の安定性と溶解性の向上
  • 機構的研究と構造-機能解析
  • 産業用または治療用バイオ触媒の開発

私たちのチームに連絡する

クリエイティブエンザイムズと提携する理由

高精度と高忠実度

私たちのプロトコルは、正確な変異の組み込みを保証し、オフターゲット効果を最小限に抑えます。

柔軟なテンプレートオプション

合成されたテンプレートとクライアント提供のテンプレートの両方をサポートし、さまざまなプロジェクトのニーズに対応します。

包括的品質管理

各構造物は、変異の成功を確認するために配列決定または分析的検証を受けます。

広範な変異タイプ

複雑な酵素工学のための単一サイト、多サイト、および組み合わせ変異導入が可能です。

迅速な対応

最適化されたワークフローにより、品質を犠牲にすることなく、タイムリーな納品が可能になります。

専門的なガイダンス

専任の専門家がプロジェクトライフサイクル全体にわたってデザインコンサルテーションと技術サポートを提供します。

ケーススタディと実世界の応用

ケース1:PROSSガイドによる変異スタッキングを通じたエンジニアリング耐熱性タンナーゼ変異体

この研究では、フラップレスタナナーゼ(FLT)変異体の安定性を向上させる変異を予測するために、プロテインリペアワンストップショップ(PROSS)を適用しました。 ラクトバチルス・プランタルム タンナーゼ(LpTan)。4つの構造状態モデル(アポ、基質結合、生成物結合、FLT)を使用して、PROSSは143の潜在的な変異を特定し、そのうち8つ(Q63T、A65D、A184Y、A257D、V276Y、T321G、G421D、G439D)が組み合わせスタッキングのために選ばれました。256メンバーの変異体ライブラリをスクリーニングした結果、いくつかの安定化バリアントが明らかになりました。最も優れたパフォーマンスを示したのはP6H7とP8E5で、Tmの増加はそれぞれ4.5°Cと6.5°Cでした。 k 野生型に対して最大30%の向上を示しています。これらの結果は、PROSSベースのスタッキングが熱安定性タンナーゼを設計するための効果的な戦略であることを強調しています。

PROSS-predicted stabilizing mutations for Lactobacillus plantarum tannase (LpTan)図1. 選択された8つのPROSS生成変異を強調したFLT構造モデル。FLTモデル構造はAlphaFoldを使用して作成され、PyMolを使用して画像化されました。シアンで示されているのは保存されたα/βヒドロラーゼドメインで、緑はキャップドメインです。活性部位の残基はオレンジで示されています。変異予測にはPROSSが使用されました。 他者., 2025年)

ケース2:構造指向型変異導入がBlTDHの活性と安定性を向上させる

この研究は改善されました バチルス・リケニフォルミス L-スレオニン脱水素酵素(BlTDH)は、ピラジン生合成における重要な酵素であり、構造に基づくサイト特異的変異導入を通じて研究されました。分子ドッキングと3Dモデリングに基づいて、5つの保存された残基(T94、H95、N157、T293、G294)がアラニンに置き換えられました。変異体の中で、N157A、T94A、T293Aはより高い触媒活性を示し、特にN157Aは2.1倍の活性向上を示し、熱安定性とpH適応性も向上しました。構造解析により、N157A変異が基質ポケットを拡大し、立体障害を減少させ、触媒作用を促進することが示されました。これらの結果は、合理的な設計が産業用食品添加物の生産に向けて、より効率的で堅牢なTDH変異体を生み出す方法を示しています。

Selected mutation sites for Bacillus licheniformis L-threonine dehydrogenase (BlTDH)図2. BlTDHの三次元構造モデルと基質ドッキング解析。(A) BlTDHの3D構造モデル。(B) ラプラス構成図。(C) 分子ドッキング3D図。(D) 分子ドッキング2D相互作用図。(Liu) 他者., 2025)

サイト指向変異導入に関するよくある質問

  • Q: 一つの構造体で複数の変異を扱うことはできますか?

    はい。私たちは、単一サイト、多サイト、および組み合わせ変異導入を高精度で定期的に行っています。いくつかのターゲット置換が必要な場合でも、複雑な変異体ライブラリが必要な場合でも、私たちのプロトコルは高い精度と再現性を保証します。
  • Q: 突然変異誘発に受け入れられるDNAテンプレートの種類は何ですか?

    A: 当社では、Creative Enzymesが合成したテンプレートと、高品質なクライアント提供のプラスミドまたはPCR産物の両方を受け付けています。すべての受け入れたテンプレートは、変異導入を開始する前に、完全性、純度、および配列の品質が検証されます。
  • Q: 突然変異の成功はどのように確認されますか?

    A: すべての構築物は、サンガーシーケンシングまたは制限酵素消化分析を通じて、変異後の検証を受けます。シーケンシングクロマトグラムとアラインメントデータは、完全なトレーサビリティのために最終報告書に提供されます。
  • Q: 突然変異誘発にはどれくらいの時間がかかりますか?

    A: 一般的なターンアラウンドタイムは、変異の複雑さ、バリアントの数、およびベクターの種類に応じて1〜3週間です。緊急プロジェクトには迅速なサービスも利用可能です。
  • Q: 突然変異設計とプライマー選択の支援をしていただけますか?

    A: もちろんです。私たちの技術チームは、変異部位の選択、プライマー設計、戦略の開発に関する専門的なコンサルテーションを提供し、効率を最大化し、実験の成功を確実にします。
  • Q: シーケンスの正確性と構造の完全性を保証しますか?

    A: はい。すべての最終構造は、希望する変異が正しく導入されていること、ならびにオフターゲットや背景変異が存在しないことを確認するために完全に検証されています。
  • Q: どのような変異タイプを導入できますか?

    A: 私たちは、点変異、挿入、欠失、飽和変異誘発など、幅広い変異タイプをサポートしています。複雑な組み合わせプロジェクトもリクエストに応じて対応可能です。
  • Q: 顧客提供のテンプレートの要件は何ですか?

    A: テンプレートは十分な量と純度(A260/A280比が1.8~2.0)で提供されるべきです。正確なプライマーと設計計画を促進するために、プラスミドマップと配列ファイルの提出をお勧めします。
  • プロジェクトの成果はどのように提供されますか?

    A: クライアントは精製されたプラスミドDNA、配列解析報告書、注釈付きベクターマップ、およびQC文書を受け取ります。保存やさらなる用途のために、オプションとしてグリセロールストックや凍結乾燥DNAを提供することもできます。
  • Q: 私のプロジェクト情報は機密として保持されますか?

    A: はい。すべてのクライアントデータ、シーケンス、および結果は厳格な機密保持の下で取り扱われます。私たちは標準的な秘密保持契約のもとで運営しており、クライアントは自らの知的財産の完全な所有権を保持します。

参考文献:

  1. シェバンヌ TD、サン=ジャック AD、ロウェン ME、ロウェン MC。熱安定性を向上させるための組み合わせ多地点指向変異導入ソリューション ラクトバチルス・プランタルム タンナーゼ 生化学細胞生物学2025年;103:1-11. doi:10.1139/bcb-2025-0134
  2. リウ X、グ H、リ H、チェン S、タン Z、クアン W。BlTDHの酵素特性の改善 バチルス・リケニフォルミス サイト特異的変異導入法を通じて。 食品化学:分子科学2025年;11:100272。doi:10.1016/j.fochms.2025.100272

研究および産業用途にのみご使用ください。個人医療用途には適していません。一部の食品グレード製品は、食品および関連用途における処方開発に適しています。

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