mRNA生産のための酵素

in Vitro mRNA合成のステップ

図1. Creative Enzymesはin vitro mRNA合成のための完全な酵素の範囲を提供しています。

in vitroでのmRNA合成は、各ステップが特定の酵素を必要とする多段階プロセスです。以下は、必要な酵素の役割とともに、重要なステップです。

1. プラスミドの線形化

mRNA合成の最初のステップは、プラスミドDNAテンプレートの線形化です。これは、線形DNAテンプレートが円形のものよりもin vitro転写においてより効率的であるため、重要です。

使用される酵素:

• BsaI, BspQI, XbaI: これらはプラスミドDNAを線形化するために使用される制限酵素です。特定の配列でプラスミドを切断することにより、in vitro転写の効率的な出発点となる線形テンプレートを作成します。

2. in Vitro転写

プラスミドが線形化されたら、次のステップはDNAからmRNAへの転写です。これはRNAポリメラーゼを使用して、DNAテンプレートからRNAを合成することで達成されます。

使用される酵素:

• T7 RNAポリメラーゼ: この酵素はDNAテンプレートからRNAの合成を触媒し、mRNAを形成するために適切なヌクレオチドを取り込みます。Creative Enzymesは、高い転写効率と忠実度を確保するために、GMPグレードのT7 RNAポリメラーゼとプレミアムT7 RNAポリメラーゼの両方を提供しています。
• 無機ピロリン酸加水分解酵素: この酵素はRNA合成中に生成される無機ピロリン酸を除去し、反応を前進させ、mRNAの収量を増加させます。
• マウス由来RNase阻害剤: RNA分子はリボヌクレアーゼ（RNase）による分解に対して脆弱です。マウス由来RNase阻害剤はRNaseに結合して阻害し、合成されたmRNAを分解から保護します。
• DNase I: この酵素は転写後にDNAテンプレートを除去するために使用され、最終的なmRNA製品がDNA汚染物質を含まないことを保証します。

3. キャッピングとポリアデニル化

mRNAを機能的かつ安定にするために、転写後修飾、すなわちキャッピングとポリアデニル化が行われます。5'キャップと3'ポリ(A)テールは、mRNAの安定性と翻訳効率に不可欠です。

使用される酵素:

• ワクシニアキャッピング酵素: この酵素はmRNAに5'キャップを追加します。キャップ構造はmRNAを分解から保護し、翻訳のために細胞機構によって認識されます。
• mRNAキャップ2'-O-メチルトランスフェラーゼ: この酵素はリボース糖の2'-O位置にメチル基を追加することにより、5'キャップをさらに修飾します。この修飾はmRNAの安定性と翻訳効率を向上させます。
• E. coliポリ(A)ポリメラーゼ: この酵素はmRNAの3'末端にポリ(A)テールを追加します。ポリ(A)テールはmRNAの安定性を向上させ、核から細胞質への輸出を助けます。

Creative EnzymesのmRNA合成における役割

Creative Enzymesは、mRNAのin vitro合成に不可欠な高品質の酵素製品とサービスを提供することにコミットしています。GMPおよび非GMP酵素を含む包括的な製品ラインを持つCreative Enzymesは、mRNAワクチンの効率的かつ信頼性の高い生産をサポートします。

Creative Enzymesの利点

• 高品質の製品: Creative Enzymesは厳格な品質基準を満たす酵素を提供し、高い純度、活性、信頼性を確保します。
• 包括的な製品範囲: T7 RNAポリメラーゼ、制限酵素、修飾酵素を含む幅広い酵素の利用可能性により、mRNA合成のワークフローが効率化されます。
• GMPグレードの酵素: 最高の品質基準を必要とするアプリケーションのために、Creative Enzymesは臨床および商業的mRNAワクチン生産に不可欠なGMPグレードの酵素を提供します。
• 専門的な技術サポート: 高度に訓練された科学者チームを持つCreative Enzymesは、顧客がmRNA合成プロセスを最適化するのを支援する専門的な技術サポートを提供します。

結論

in vitroでのmRNA合成は、複数のステップと専門的な酵素を含む複雑なプロセスです。Creative Enzymesが提供する酵素は、このプロセスの各段階、すなわちプラスミドの線形化からmRNAのキャッピングおよびポリアデニル化まで、重要です。高品質の酵素と専門的なサポートを提供することにより、Creative EnzymesはmRNAワクチンの生産を進展させ、世界の健康ソリューションに貢献しています。