RNA指向性DNAポリメラーゼの酵素活性測定

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RNA指向のDNAポリメラーゼ（EC 2.7.7.49; 逆転写酵素; RT）は、主に鳥類骨髄芽腫ウイルス（AMV）やモロニーマウス白血病ウイルス（MMLV）などのレトロウイルスから派生しており、これらの酵素を使用してRNAテンプレートから相補的DNA（cDNA）を生成するプロセスを逆転写と呼びます。しかし、非レトロウイルスもRTを使用します。例えば、B型肝炎ウイルス（HBV）です。AMVおよびMMLVのRTは多機能酵素ですが、主にRNA指向のDNAポリメラーゼとして使用されます。具体的には、オリゴデオキシヌクレオチド（オリゴポリマーまたは短い特定またはランダムなDNA配列のコレクション）がRNAテンプレート上での延長のためのプライマーとして使用されます。RNAテンプレートから合成されたDNAは相補的DNA（cDNA）と呼ばれます。さらに、RTはDNA指向のDNAポリメラーゼ活性も持っています（図1）。ただし、dNTPの取り込みは非常に遅く、約1秒あたり5ヌクレオチドです。加えて、逆転写酵素のDNAポリメラーゼ活性は3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を欠いており、特定のアプリケーションにとって有利です。さらに、RTの第三の活性はRNA:DNAハイブリッド内のRNAを分解します（図2）。機能的には、RNase H活性はレトロウイルスのライフサイクルの有用な部分として機能しますが、DNA分子がハイブリダイズされたRNA分子の一部を選択的に破壊することもできます。

図1: 逆転写酵素は5’→3’ DNAポリメラーゼ活性（DNA指向のDNAポリメラーゼ活性）を示します。
参考文献: Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

図2: 逆転写酵素は5’→3’および3’→5’エキソリボヌクレアーゼ活性（RNase H活性）も示します。
参考文献: Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

RTは生物分析、薬剤開発、抗ウイルス療法において重要な役割を果たします。例えば、RTは研究でポリメラーゼ連鎖反応技術をRNAに適用するために一般的に使用される技術である逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）に使用されます。さらに、HIV-1のRTは抗ウイルス療法の主要なターゲットとして機能します。RTは癌治療に関連していると報告されています。

したがって、上記の機能は、異なるレトロウイルスの定量化および特性評価のツールとしてのRT活性アッセイの不可欠性と重要性を示しています。Creative Enzymesは、RTの最も信頼できる活性アッセイを提供するための完全な資格を持っています。カラーメトリックRTアッセイは、細胞培養やその他の生物学的サンプルにおけるRT活性の定量的測定の方法として、研究研究での使用のために設計されています。このアッセイは、HIV-1、HIV-2、AMV、MMLVなどのさまざまなレトロウイルスからのRT活性を測定するのに有用であることが示されています。Creative Enzymesは、RTの活性アッセイに関するニーズの詳細をお伺いし、テストの適切な操作を確保します。

図3: ヒト免疫不全ウイルス1型のRTの結晶構造。
PDB: 1HMV