RNA指令性DNAポリメラーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、RNA依存性DNAポリメラーゼの酵素活性アッセイを提供いたします。当社は、グローバル市場における酵素解析サービスの最も信頼できるプロバイダーとしての地位確立に注力しています。現在、Creative Enzymesは酵素アッセイ分野のリーディングカンパニーとして高い評価を得ており、顧客満足度の高いサービス提供で広く知られています。迅速な対応、最適なカスタマーケア、そして専任体制による取り組みにより、当社は最も選ばれるベンダーとなっています。

RNA依存性DNAポリメラーゼ（EC 2.7.7.49；逆転写酵素；RT）は、主としてトリ肉腫ウイルス（AMV）やMoloneyマウス白血病ウイルス（MMLV）などのレトロウイルスに由来し、RNA鋳型から相補的DNA（cDNA）を合成するために用いられます。この過程は逆転写と呼ばれます。一方で、B型肝炎ウイルス（HBV）のように、非レトロウイルスでもRTが利用される例があります。AMVおよびMMLV由来RTは多機能酵素ですが、主としてRNA依存性DNAポリメラーゼとして使用されます。具体的には、オリゴデオキシヌクレオチド（オリゴポリマー、または短い特異的配列もしくはランダム配列DNAの混合物）がプライマーとして用いられ、RNA鋳型上で伸長反応が進行します。RNA鋳型から合成されたDNAは相補的DNA（cDNA）と呼ばれます。さらに、RTはDNA依存性DNAポリメラーゼ活性（図1）も有しますが、dNTPの取り込み速度は非常に遅く、約1秒あたり5ヌクレオチド程度です。加えて、逆転写酵素のDNAポリメラーゼ活性には3’→5’エキソヌクレアーゼ活性が欠如しており、用途によっては利点となり得ます。さらに、RTの第3の活性として、RNA:DNAハイブリッド中のRNAを分解する活性（図2）があります。機能的には、RNase H活性はレトロウイルスのライフサイクルにおいて有用な要素である一方、DNA分子がハイブリダイズしたRNA分子の一部を選択的に分解することも可能です。

図1：逆転写酵素は5’→3’ DNAポリメラーゼ活性（DNA依存性DNAポリメラーゼ活性）を示す。
参考文献：Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

図2：逆転写酵素は5’→3’および3’→5’エキソリボヌクレアーゼ活性（RNase H活性）も示す。
参考文献： Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

RTは、生物学的解析、医薬品開発、および抗ウイルス療法において中核的な役割を担います。例えば、RTは研究用途において、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）と呼ばれる手法により、RNAを対象としたPCR技術の適用に広く用いられています。さらに、HIV-1由来RTは抗ウイルス療法における主要な標的です。RTはがん治療との関連も報告されています。

以上の機能は、各種レトロウイルスの定量および特性解析のツールとして、RT活性アッセイが不可欠かつ重要であることを示しています。Creative Enzymesは、RTに対する最も信頼性の高い活性アッセイを提供するための十分な資格と体制を備えています。比色法によるRTアッセイは研究用途向けに設計されており、細胞培養系およびその他の生体試料中のRT活性を定量的に測定する方法として使用できます。本アッセイは、HIV-1、HIV-2、AMV、MMLVなど、さまざまなレトロウイルス由来RT活性の測定に有用であることが示されています。Creative Enzymesは、RT活性アッセイに関するお客様のご要望の詳細をお伺いし、試験が適切に実施されるよう確実に対応いたします。

図3：ヒト免疫不全ウイルス1型由来RTの結晶構造。
PDB：1HMV