チミジンキナーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、チミジンキナーゼの酵素活性を高精度に測定するための最先端の分光光度法アッセイを提供しています。当社は、特定課題の解決、目的プロセスの再現（プロセスミラーリング）、および新規手法開発に至るまで、全期間を通じてお客様と協働することが可能です。お客様との緊密な連携こそが当社の企業成功の基盤であり、多くのお客様に長年にわたりご愛顧いただいています。

チミジンキナーゼ（EC 2.7.1.21；旧分類ではEC 2.7.1.75；TK）は、ATPのγリン酸をマグネシウム依存的にチミジン（dThd）へ転移させ、チミジン一リン酸（dTMP）を生成する反応を触媒することにより、ピリミジン・サルベージ経路の開始に必須の酵素です。dTMPはさらに細胞内酵素により2'-デオキシチミジン三リン酸（dTTP）へとリン酸化され、複製時にDNAポリメラーゼの基質として機能します。したがって、チミジンキナーゼはdTTPプールを制御し、DNA生合成における重要な制御酵素です。哺乳類のチミジンキナーゼは2つのアイソザイムに分類されます。細胞質酵素であるTK1は基質特異性が狭く、デオキシチミジンおよびデオキシウリジンのみをリン酸化し、厳密に細胞周期依存性です。TK1活性は非増殖細胞では低いか、または認められず、G1後期で出現し、DNA合成の増加と密接に相関してS期で上昇し、有糸分裂期に急速に消失します。この変動は、DNA複製に必要なdTTPをバランスよく供給するうえで極めて重要です。TK2はミトコンドリア酵素であり、細胞周期非依存性です。

さらに、チミジンキナーゼは配列および基質特異性に基づき2つのサブグループに分類されます。I型チミジンキナーゼには、単純ヘルペスウイルスTK（HSV-TK）およびヒトミトコンドリアTK2が含まれます。より広く分布するII型チミジンキナーゼは、真核生物、細菌、ならびに牛痘、天然痘、ワクシニア、ポックスウイルス科など多くのウイルスを含む、ほとんどの生物に存在します。これら多様なウイルスは治療介入の有望な標的となり得ます。そのため、チミジンキナーゼは、抗ウイルス療法および抗がん化学療法で用いられるデオキシヌクレオシド系プロドラッグの活性化において重要な役割を担います。例えば、II型TKによるプロドラッグ活性化能は、HIV治療において既に報告されています。

したがって、チミジンキナーゼの機能的意義をより包括的に追究するためには、チミジンキナーゼ活性をモニタリングできることが重要です。Creative Enzymesは、チミジンキナーゼに対する信頼性の高い酵素アッセイを提供できる十分な体制を有しています。詳細として、チミジンキナーゼ活性はカップリング分光光度法アッセイにより測定可能であり、ADP生成をピルビン酸キナーゼ／乳酸脱水素酵素反応を介したNADH生成にカップリングし、340 nmでモニタリングします。Creative Enzymesの製品は、グローバル市場において最も信頼され、実績に裏付けられており、お客様のニーズに対応する高品質データの取得に貢献します。Creative Enzymesの科学的知見および技術サポートにより、お客様の製品は市場において強固なプレゼンスを確立できます。

図： ヒトチミジンキナーゼ1の結晶構造。
PDB： 1XBT