ガラクトキナーゼの酵素活性測定

長年の開発と探求の結果、Creative Enzymesは酵素アッセイを提供する世界的なリーダーとしての地位を確立しました。私たちの会社の伝統の核心的な価値として、サービスの質が継続的な成功の基本的な要件であると固く信じています。Creative Enzymesは、自然を科学に取り入れるという同じ起業家精神と革新の精神で成長を続けています。最も先進的な分光光度計を完備し、ガラクトキナーゼの活性アッセイを専門的かつ迅速に提供できることを誇りに思っています。

ほとんどの生物において、β-D-ガラクトースをより代謝的に有用なグルコース1-リン酸に変換するのは、レロワ経路を構成する4つの酵素の作用によって達成されます。ガラクトキナーゼ（EC 2.7.1.6; ATP:α-D-ガラクトース1-ホスホトランスフェラーゼ）は、この経路の第2ステップ、すなわちα-D-ガラクトースをガラクトース1-リン酸に変換する反応を触媒します（図1参照）。ガラクトキナーゼは、糖代謝と変換における重要な役割のため、長年にわたり重要な研究の注目を集めています。例えば、この酵素の欠陥は人間においてガラクトース血症と呼ばれる病的状態を引き起こします。また、最近では、指向進化を通じて新しい天然および非天然の糖-1-リン酸を合成するために開発されました。さらに、ガラクトキナーゼ様の分子は、細胞内のガラクトース濃度のセンサーとして機能し、適切な条件下では転写調節因子としても機能します。

図1: レロワ経路。β-D-ガラクトース1-リン酸への変換に関与する酵素的ステップ。
参考文献: Holden H M, et al. Cellular & Molecular Life Sciences Cmls, 2004, 61(19-20):2471-2484.

ヒト、酵母、植物、細菌を含むさまざまな生物からガラクトキナーゼが分離され、発現され、特性評価されました。これらの酵素は異なる特異的活性を示します。例えば、Saccharomyces cerevisiae（ScGalK）由来のガラクトキナーゼは、Escherichia coli（EcGalK）由来のガラクトキナーゼよりも150倍以上効率的です。さらに、基質特異性の研究により、ガラクトキナーゼはC-2およびC-6でのガラクトース（Gal）の修飾を許容できることが明らかになりました。例えば、Galの他に、2-デオキシガラクトース（Gal2D）および6-デオキシガラクトース（Gal6D、D-フコースとしても知られる）はEcGalKおよびScGalKの可能な基質です。哺乳類およびE. coli由来のガラクトキナーゼはN-アセチル-α-D-ガラクトサミンに対して活性を示さないことに注意してください。基質の多様性のために、分光光度法を用いたガラクトキナーゼの活性アッセイは産業規模で確立されていないが、他の方法を用いた活性測定は以前に報告されています。Creative Enzymesは、分光光度法によるガラクトキナーゼの最も正確な酵素アッセイを提供する能力を完全に備えています。ガラクトキナーゼの活性は、連結アッセイによって分光光度法で測定されました。α-D-ガラクトースからα-D-ガラクトース1-リン酸への変換速度は、NADHの存在下でピルビン酸から乳酸の生成と反応を結合させることによって監視されました。したがって、ガラクトキナーゼの活性はNADHの生成を測定することによって340nmで決定されました。

Creative Enzymesは、高品質のバイオ分析サービスおよび酵素分析に特化した契約研究のリーディングカンパニーであり、世界中のクライアントのニーズに応えています。私たちの製品の質は、酵素アッセイの方法をテストし最適化することに時間を捧げている多くの優れた科学者によって保証されています。全体として、Creative Enzymesはガラクトキナーゼを含む製品の開発において最良の選択肢です。

図2: S. cerevisiae由来のガラクトキナーゼの結晶構造。
PDB: 2AJ4