ADP特異的グルコキナーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、自社開発による特異的かつカスタマイズ可能な活性アッセイにより、市場において卓越した存在感を示しています。当社はお客様とプロセス全体を通じて密に連携し、個別課題の解決、お客様の工程の再現、新規酵素活性定量法の開発を行っています。当社の目標は、酵素アッセイのコストを低減し、すべての研究者が利用可能な形で提供することです。最終的に、高品質と低コストが当社を他社競合と差別化しています。ここに、ADP特異的グルコキナーゼに対する信頼性の高い酵素アッセイをご提供できることを誇りに思います。

ATPは、生体内における自由エネルギー貯蔵において多様な役割を担っています。さらに、ATPはキナーゼ反応におけるリン酸基供与体としても機能します。ATP依存性ヘキソキナーゼは、ATPをリン酸基供与体として用い、グルコースのリン酸化を触媒します。ヒト、酵母、Schistosoma mansoniなど、幅広い生物種から単離された既知のATP依存性ヘキソキナーゼは、いずれも高い相同性を示します。一方、ADP特異的グルコキナーゼは、ADPをリン酸基供与体として用いてグルコースのリン酸化を触媒することが示されています。ADP特異的グルコキナーゼは、ホモ二量体（Pyrococcus furiosus）または単量体（Thermococcus litoralis）タンパク質として構成され、ADPおよびグルコースに対して高い特異性を有します。

ADP特異的キナーゼの存在は、生体システムに主として2つの利点をもたらします。1つ目は、ADPがATPよりも高い熱安定性を示すこと、特に二価カチオン（Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺など）の存在下で顕著であることです。2つ目は、ADPを産生する同化反応がADP依存性キナーゼの基質を供給し、エネルギーチャージが低い条件下における糖の活性化を促進することです。超好熱性古細菌由来のADP特異的グルコキナーゼおよびホスホフルクトキナーゼは相同性を有し、新規のキナーゼ群を形成することが見出されています。現在までにADPを利用する他のキナーゼは知られていないため、この新規キナーゼ群は、キナーゼの進化的起源に光を当て得る極めて稀少なモデルです。そのため、これらの酵素は酵素進化研究への応用において、ますます注目を集めています。

本酵素自体の特異性により、分光光度法を用いたADP特異的グルコキナーゼの活性アッセイは、産業規模で十分に確立されていません。しかし、分光光度法は、本酵素の活性定量において最も信頼性が高く、かつ費用対効果に優れた手法であることが示されています。幸いにも、Creative Enzymesは、ADP特異的グルコキナーゼの酵素活性を正確に測定するための最先端の分光光度計測機器をご提供できると確信しています。例えば、ADP特異的グルコキナーゼは、酵母由来グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼとのカップリングアッセイにより、NADPH生成量を測定することで評価されます。本アッセイは50℃で実施されます。この温度では酵母酵素は活性を維持し、ADP特異的グルコキナーゼも活性測定に十分な活性を示します。NADPHの吸光度は334 nmで追跡します。

Creative Enzymesは、お客様向けのバイオアナリティカルサービスおよび酵素アッセイの開発、最適化、供給におけるグローバルリーダーです。当社の迅速なサービス、最高水準のカスタマーケア、そして専任体制によるアプローチにより、当社は競合他社と比較して最も選ばれるベンダーとなっています。

図：T. litoralis由来ADP特異的グルコキナーゼの結晶構造。
PDB：4B8R