パントテインリン酸アデニリルトランスフェラーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、酵素活性アッセイにおける最新の開発および知見をご紹介しています。最高品質のサービス提供を継続的に追求することで、Creative Enzymesは数千社に及ぶお客様から信頼を獲得してまいりました。当社は、高度にカスタマイズされた高精度のバイオアナリティカルサービスを専門としております。ここに、パントテイン-リン酸アデニリルトランスフェラーゼに対する最も信頼性の高い酵素アッセイをご提供いたします。

補酵素A（CoA）は、すべての生細胞における主要なアシル基キャリアであり、中間代謝における多数の反応に必須です。CoAはまた、多様な生合成、分解、およびエネルギー産生代謝経路において重要な役割を担います。生細胞内では、CoAはパントテン酸（ビタミンB₅）、システイン、およびATPから5段階で生合成されます。パントテイン-リン酸アデニリルトランスフェラーゼ（EC 2.7.7.3；PPAT）は、この生合成経路の終盤から2番目の段階を触媒し、4’-ホスホパントテインをアデニル化してデホスホ-CoAを生成します。続いて、デホスホ-CoAキナーゼ（EC 2.7.1.24）によるリボース環3’-ヒドロキシル基のリン酸化により、アシル基キャリアであるCoAが生成されます。CoA生合成速度は、経路の第一酵素であるパントテン酸キナーゼ（EC 2.7.1.33）に対するフィードバック阻害により制御されます。CoA生合成中間体に関する研究から、パントテン酸および4’-ホスホパントテインの双方が細胞内に蓄積し得ることが示されており、PPATがCoA生合成経路における追加の律速段階を触媒している可能性が示唆されています。

図1：E. coliにおけるCoA生合成。
参考文献： Miller J R, et al. Journal of bacteriology, 2007, 189(22): 8196-8205.

PPATは、ヌクレオチジルトランスフェラーゼα/βホスホジエステラーゼファミリーに属し、ヌクレオチド一リン酸（NMP）部分を他の基質へ転移する酵素です。細菌由来PPATはアロステリックなホモ六量体として存在します。PPATはCoA生合成経路における重要な制御段階を触媒し、かつヒトPPATは細菌由来のものと構造が明確に異なることから、有望な抗菌薬標的として位置付けられます。

PPAT活性は、カップルドアッセイを用いて分光光度法により測定可能です。例えば、PPAT活性は逆反応方向で評価され、ヘキソキナーゼおよびグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼを用いてATP産生をNADP+還元に連結します。アッセイは室温で実施し、340 nmにおける吸光度変化をモニタリングします。当社の結果品質は、最先端の分光光度計により担保されています。標準的な活性測定から特別なご要望まで、迅速なアッセイターンアラウンドで競合他社を凌駕します。総じて、Creative Enzymesは信頼できるパートナーとして、貴社からのご用命を心よりお待ちしております。

図2：E. coli由来パントテイン-リン酸アデニリルトランスフェラーゼの結晶構造。
PDB：1H1T