クロマトグラフィーアッセイを用いたヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、酵素アッセイに特化した豊富な実績を有するバイオテクノロジー企業です。最新鋭の機器、最先端技術、ならびに卓越した専門家チームを備え、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼを含むトランスフェラーゼ酵素について、信頼性の高いアッセイサービスを提供できる体制を整えています。

ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼ（EC 2.4.2.6）は、2’-デオキシリボヌクレオシドのプリンまたはピリミジン塩基と、遊離のピリミジンまたはプリン塩基との間の交換反応を触媒します。これらの酵素は、同一プロセスを触媒するヌクレオシドホスホリラーゼに代わる選択肢となります。2’-デオキシリボヌクレオシドに特異的であり、高い位置選択性（レジオ選択性）と立体選択性を示し、β-アノマーのみが選択的に生成されます。ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼは当初、乳酸菌で報告され、その後、特定のStreptococcus種や、Crithidia luciliae、Trypanosoma brucei、Borrelia burgdorferiなどの寄生性単細胞真核生物においても見出されています。

図1：ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼが触媒する反応。E：酵素、B1およびB2：プリンまたはピリミジン。
参考文献： Fernándezlucas J, et al. Applied & Environmental Microbiology, 2010, 76(5):1462-70.

乳酸菌では、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼとして2種類が報告されています。タイプIはプリンデオキシリボシルトランスフェラーゼで、2’-デオキシリボースを2つのプリン間で転移する反応に特異的です。タイプIIはヌクレオシド2’-デオキシリボシルトランスフェラーゼで、プリンまたはピリミジンのいずれの間でもデオキシリボースの転移を触媒します。両酵素はいずれも、共有結合性のデオキシリボキシル化酵素中間体の形成を伴うピンポン（bi-bi）機構に従います。そのため、これらの酵素は2’-デオキシリボシルヌクレオシドの「ワンポット」合成に利用可能です。この生体変換は、反応が極めて温和な条件下で進行し、環境負荷の低いクリーンな化学技術を提供できることから、有望なプロセスとされています。

クロマトグラフィーアッセイは、ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼ活性の測定において最も信頼性の高い方法であることが示されています。Creative Enzymesは、酵素活性を高精度に測定するための最先端クロマトグラフィー技術を提供します。例えば、デオキシアデノシンの生成量は254 nmの吸光度で高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により解析し、生成したデオキシシチジンは逆相HPLCで分離した上で260 nmの吸光度で測定します。Creative Enzymesは、受注日から最短期間で製品を提供することをお約束します。迅速な対応、最良のカスタマーケア、ならびに専任リソースにより、Creative Enzymesはすべてのお客様にとって最も選ばれるサプライヤーとなっています。

図2：Lactobacillus leichmannii由来ヌクレオシドデオキシリボシルトランスフェラーゼの結晶構造。
PDB：1F8X