チミジンホスホリラーゼの酵素活性測定のための分光光度法アッセイの使用

Creative Enzymes は、酵素活性アッセイを専門とする産業バイオテクノロジー企業です。私たちは、サービスの質が企業の成功の基本的な要件であり、高い顧客満足度の基盤であると固く信じています。Creative Enzymesの専門技術と高品質なサービスは、トランスフェラーゼのさまざまな活性アッセイにおいて、世界中の顧客をサポートしています。

チミジンホスホリラーゼ（EC 2.4.2.4; TP）は、チミジン、デオキシウリジン、およびそれらの類似体の可逆的なホスホロリシスを触媒するユニークな代謝制御酵素です。これは、1つのデオキシヌクレオシドから別の塩基へのデオキシリボシル転移を触媒し、2番目のヌクレオシドを形成します。チミジンホスホリラーゼは、2つの同一のサブユニットからなる二量体酵素であり、哺乳類では各サブユニットの分子量は約55,000ダルトンです。ヒトのチミジンホスホリラーゼは、Escherichia coli のチミジンホスホリラーゼと39%の配列同一性を共有し、重要な配列相同性を生じます。

図1: チミジンとチミジンホスホリラーゼのホスホロリシス反応。
参考文献: Hatano A, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(7):3866-70.

ホスホロリシス反応のメカニズムは、求核的プロセスと考えられています：リボシル1-アノメリック炭素は、そのα面でリン酸イオンの付加を受けます。チミジンホスホリラーゼがTPI（5-クロロ-6-[1-(2-イミノピロリジニル)メチル]ウラシル）HClと複合体を形成した結晶構造が報告されており、この抑制された複合体を通じてメカニズムをさらに確認しています。

チミジンホスホリラーゼは、血小板由来内皮細胞増殖因子（PD-ECGF）と同一であり、チミジンホスホリラーゼの酵素活性は血管新生に必要です。したがって、チミジンホスホリラーゼは抗腫瘍薬の開発において良いターゲットです。チミジンホスホリラーゼの触媒挙動を特性化することは、基本的な重要性を持ち、新しい抗腫瘍剤の設計への第一歩となります。

過去数年間にわたり、多くの酵素の活性をテストしてきたCreative Enzymesは、豊富で専門的な経験を蓄積しており、チミジンホスホリラーゼの迅速かつ最高品質のアッセイサービスを提供できます。チミジンホスホリラーゼの酵素活性は、25°Cで290 nmのヌクレオチドの吸収の差を連続的に測定することによって分光光度法で決定できます。最も先進的な分光光度計を完備しており、私たちはテストの信頼性を保証します。

図2: E.coli.からのチミジンホスホリラーゼの結晶構造。
PDB: 4EAF