分光光度法アッセイを用いたチミジンホスホリラーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、酵素活性アッセイに特化した産業バイオテクノロジー企業です。当社は、サービス品質こそが企業としての成功の基本要件であり、また高い顧客満足度の基盤であると確信しています。Creative Enzymesの専門的な技術と高品質なサービスは、チミジンホスホリラーゼを含む各種トランスフェラーゼの活性アッセイにおいて、世界中のお客様を支援しています。

チミジンホスホリラーゼ（EC 2.4.2.4；TP）は、チミジン、デオキシウリジンおよびそれらの類縁体の可逆的なホスホロリシスを触媒し、それぞれ対応する塩基と2-デオキシリボース-1-リン酸へ変換する、特異な代謝制御酵素です。また、あるデオキシヌクレオシドから別の塩基へのデオキシリボシル基転移を触媒し、第二のヌクレオシドを生成します。チミジンホスホリラーゼは同一の2つのサブユニットからなる二量体酵素であり、哺乳類では各サブユニットの分子量は約55,000ダルトンです。ヒトのチミジンホスホリラーゼは、Escherichia coli由来チミジンホスホリラーゼと配列同一性が39%であり、顕著な配列相同性が認められます。

図1：チミジンホスホリラーゼによるチミジンのホスホロリシス反応。
参考文献：Hatano A, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(7):3866-70.

ホスホロリシス反応の機構は求核過程と考えられており、リボシル1位のアノマー炭素に対して、リン酸イオンがα面から付加します。さらに、TPI（5-クロロ-6-[1-(2-イミノピロリジニル)メチル]ウラシル）塩酸塩と複合体を形成し活性型コンフォメーションをとるチミジンホスホリラーゼの結晶構造が報告されており、この阻害複合体を通じて当該機構が一層裏付けられています。

チミジンホスホリラーゼは血小板由来内皮細胞増殖因子（PD-ECGF）と同一であり、血管新生にはチミジンホスホリラーゼの酵素活性が必要です。したがって、チミジンホスホリラーゼは抗腫瘍薬開発における有望な標的です。チミジンホスホリラーゼの触媒挙動を特性解析することは基礎的に重要であるとともに、新規抗腫瘍剤の設計に向けた第一段階となります。

過去数年間にわたり多数の酵素活性を評価してきた実績により、Creative Enzymesは豊富かつ専門的な経験を蓄積しており、チミジンホスホリラーゼに対して迅速かつ最高水準のアッセイサービスを提供可能です。チミジンホスホリラーゼの酵素活性は、25℃において、290 nmでのヌクレオチドの吸光度差を連続測定する分光光度法により定量できます。最新鋭の分光光度計を完備しており、試験結果の信頼性を保証します。

図2：E. coli由来チミジンホスホリラーゼの結晶構造。
PDB：4EAF