分光光度法アッセイによるシキミ酸デヒドロゲナーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、長年にわたり酵素活性アッセイ分野をリードしてきました。当社は、工業スケールでの迅速な活性測定ならびに、あらゆる特別要件に対応した高度にカスタマイズ可能な活性アッセイを提供しています。卓越した専門チームが、分光光度法を用いたシキミ酸デヒドロゲナーゼを含む酸化還元酵素の活性測定に特化しています。

シキミ酸デヒドロゲナーゼ（EC 1.1.1.25）は、NADPH依存的に3-デヒドロシキミ酸をシキミ酸へ可逆的に還元する反応を触媒します。本酵素はカルボニル基の炭素–酸素二重結合を水酸基へ還元し、その過程で補酵素NADPHはNADP+へ酸化されます。本酵素はフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンの生合成に関与し、シキミ酸経路の一段階を担います。シキミ酸経路は細菌、植物、真菌、藻類および寄生生物に必須であり、炭水化物代謝を起点としてフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンなどの芳香族アミノ酸を生合成する経路です。一方、シキミ酸経路は動物およびヒトには存在しません。その結果、これら3種の芳香族アミノ酸は食事から摂取する必要がある必須アミノ酸となります。本酵素クラスの系統名は shikimate:NADP+ 3-oxidoreductase であり、以下の名称でも知られています：

• dehydroshikimic reductase、
• shikimate oxidoreductase、
• shikimate:NADP+ oxidoreductase、
• 5-dehydroshikimate reductase、
• shikimate 5-dehydrogenase、
• 5-dehydroshikimic reductase、
• DHS reductase、
• shikimate:NADP+ 5-oxidoreductase
• AroE。

シキミ酸経路はヒトおよび動物には存在しないため、除草剤および抗菌剤の有望な標的として位置付けられています。耐性の拡大により、より多くの除草剤や抗生物質が有効性を失いつつあることから、シキミ酸デヒドロゲナーゼに関する研究は新たな注目領域となっています。さらに、同一経路内で阻害対象となる酵素の多様性を維持することは、より高い殺菌率の達成においても重要です。現行の抗菌治療の見通しが厳しい状況にある中、強力かつ低毒性のシキミ酸デヒドロゲナーゼ阻害剤に対する需要は継続的に増加しています。シキミ酸デヒドロゲナーゼの活性試験はこれまでにも報告されていますが、アッセイの実施は決して容易ではありません。基質の不安定性および他酵素による干渉を受けやすいことが、測定を困難にしています。Creative Enzymesは、科学者チームと最先端機器の支援により、これらの課題をすべて克服しています。340 nmにおける吸光度変化を測定し、NADPH濃度の変動を指標として、反応のいずれの方向においても酵素活性を高精度にモニタリングできます。

Creative Enzymesは、シキミ酸デヒドロゲナーゼ向け最新の活性アッセイをご提供できることを光栄に存じます。お客様の成功に向けて、当社は協働に前向きに取り組みます。医薬品、農業、または獣医領域のいずれに従事されている場合でも、当社は一貫して高品質な活性測定結果を提供いたします。

図：シキミ酸デヒドロゲナーゼの結晶構造。NADPH（黄色）に対する特異的結合ループ（緑）を示す。
参考文献：Ye, S. et. al., A. J. Bacteriol. 2003, 185 (14), 4144.