アルファ-D-キシロシドキシロヒドロラーゼの酵素活性測定

クリエイティブエンザイムズは、さまざまな酵素アッセイ、特に酵素活性測定を提供しています。私たちは顧客と密接に連携し、製品開発やプロセス最適化のニーズをサポートします。過去数年間にわたり、幅広い酵素の活性をテストしてきたクリエイティブエンザイムズは、α-D-キシロシドキシロヒドロラーゼのような加水分解酵素の迅速かつ高品質な活性アッセイを可能にする豊富な経験を蓄積しています。

α-D-キシロシドキシロヒドロラーゼ（EC 3.2.1.177; α-キシロシダーゼ）は、α-キシロシドの非還元末端側からα-キシロースを放出する反応を触媒する酵素です。微生物や植物からのいくつかのα-キシロシダーゼは精製され、特性が明らかにされていますが、そのアミノ酸配列は完全には調べられていません。アミノ酸配列が解明されたα-キシロシダーゼの酵素学的研究の例はほとんどありません。これらの中で、Sulfolobus solfataricus由来のα-キシロシダーゼは、90 °Cで最適な活性を示し、イソプライムベロースやα-D-キシロピラノシル-(1,6)-D-グルコピラノース、さらにはマルトースやマルトトリオースなどのオリゴ糖に対して高い加水分解活性を持っています。ナスタチウム、アラビドプシス、および松のα-キシロシダーゼは、グリコシド加水分解酵素（GH）ファミリー31の酵素であることが確立されており、キシログルカンの代謝に関与していると考えられています。Lactobacillus pentosusでは、α-キシロシダーゼをコードするxylQがイソプライムベロースの代謝に関与していることが示されています。しかし、α-キシロシダーゼの酵素特性についてはほとんど知られていません。

GH-31由来の代表的なα-キシロシダーゼは、二段階のメカニズムを利用します。最初のステップでは、酵素が基質（ドナー）からアグリコン基を離脱させ、グリコシルエステル中間体を形成します。第二のステップでは、酵素がドナーのアノメリック炭素を攻撃するヌクレオフィルによって脱グリコシル化され、共有結合中間体が切断され、基質のアノメリック構成が全体として保持されます。水とは異なるヌクレオフィルがグリコシル酵素中間体を捕らえると、トランスグリコシル化が起こり、グリコシル化された生成物が生成されます。

α-キシロシダーゼは酵素学的に特性が明らかにされていますが、その構造やメカニズムについてはほとんど知られていません。メカニズムに関する情報が限られている理由の一つは、便利な活性アッセイがないことです。クリエイティブエンザイムズは、α-キシロシダーゼの酵素活性の最高水準のアッセイを提供できることを誇りに思っています。α-キシロシダーゼの活性は、キシロースの放出を分光光度法で測定することによって決定されます。反応混合物中で放出されるキシロースの量は、p-ブロモアニリン法を使用して測定されます。

最も重要なリソースである、熟練した経験豊富な科学者たちがいるクリエイティブエンザイムズは、酵素活性のための高度なアッセイを提供できることを嬉しく思います。全体として、私たちの最先端の酵素活性測定技術は、α-キシロシダーゼに関与する研究開発活動に最適な選択肢です。

図: Escherichia coli由来のα-キシロシダーゼの結晶構造。
PDB: 1WE5