α-D-キシロシド・キシロヒドロラーゼの酵素活性測定

Creative Enzymesは、多様な酵素アッセイ、とりわけ酵素活性測定サービスを提供しています。お客様の製品開発およびプロセス最適化のニーズを支援するため、密接に連携して対応いたします。過去数年にわたり幅広い酵素の活性を評価してきた実績に基づき、Creative Enzymesは豊富な知見を蓄積しており、α-D-キシロシドキシロヒドロラーゼなどの加水分解酵素（ヒドロラーゼ）について、迅速かつ高品質な活性アッセイを実施可能です。

α-D-キシロシドキシロヒドロラーゼ（EC 3.2.1.177；α-キシロシダーゼ）は、α-キシロシドの非還元末端側からα-キシロースを遊離させる反応を触媒する酵素です。微生物および植物由来の一部のα-キシロシダーゼは精製・特性解析が行われているものの、アミノ酸配列が完全に検討された例は限られています。アミノ酸配列が解明されたα-キシロシダーゼに関する酵素学的研究例は少数です。その中で、Sulfolobus solfataricus由来のα-キシロシダーゼは90℃で至適活性を示し、イソプリメベロース、α-D-キシロピラノシル-(1,6)-D-グルコピラノースなどのα-キシロシドに加え、マルトースやマルトトリオースなどのオリゴ糖に対しても高い加水分解活性を示します。ナスタチウム、Arabidopsis、およびマツ由来のα-キシロシダーゼは、グリコシド加水分解酵素（GH）ファミリー31に属する酵素であることが確立されており、キシログルカン代謝に関与すると考えられています。Lactobacillus pentosusでは、α-キシロシダーゼをコードするxylQがイソプリメベロース代謝に関与することが示されています。しかしながら、当該α-キシロシダーゼの酵素学的特性については不明な点が多く残されています。

GH-31に属する代表的なα-キシロシダーゼは、2段階の反応機構を利用します。第1段階では、酵素が基質（ドナー）からアグリコン基の離脱を触媒し、その結果としてグリコシルエステル中間体が形成されます。第2段階では、ドナーのアノマー炭素を攻撃する求核剤により酵素が脱グリコシル化され、共有結合性中間体が開裂します。これにより、基質のアノマー配置は全体として保持されます。水とは異なる求核剤がグリコシル酵素中間体を捕捉した場合、糖転移反応（トランスグリコシル化）が起こり、グリコシル化生成物が生成します。

α-キシロシダーゼは酵素学的に特性解析されているものの、その構造および反応機構に関する知見は極めて限定的です。機構情報が限られている要因の一つとして、簡便な活性アッセイが不足していることが挙げられます。Creative Enzymesは、α-キシロシダーゼの酵素活性に関するクラス最高水準のアッセイを提供できることを誇りとしています。α-キシロシダーゼの活性は、キシロースの遊離量を分光光度法により測定して評価します。反応混合液中に遊離したキシロース量は、p-ブロモアニリン法を用いて定量します。

最も重要なリソースである、熟練かつ経験豊富なCreative Enzymesの科学者により、先進的な酵素活性アッセイをご提供いたします。総じて、当社の最先端の酵素活性測定技術は、α-キシロシダーゼを対象とするあらゆる研究開発活動において理想的な選択肢です。

図：Escherichia coli由来α-キシロシダーゼの結晶構造。
PDB：1WE5