ランダム変異導入およびDNAシャッフルのための遺伝子合成

高忠実度の遺伝子合成は現代の基盤を形成しています。 酵素工学DNA設計に対する正確な制御を可能にし、突然変異誘発および組換えのための最適化されたテンプレートの作成を実現します。 クリエイティブ酵素私たちは提供します カスタム遺伝子合成サービス 特にサポートするために調整された ランダム変異誘発およびDNAシャッフルのワークフロー。

高度な配列最適化アルゴリズム、コドン調和、および独自の合成技術を統合することで、ライブラリ生成や再組換え実験に直接使用できる高品質でエラーのないDNA構造体を提供します。私たちのサービスは、迅速かつ信頼性の高い確認済み遺伝子へのアクセスを求める酵素エンジニアをサポートするように設計されており、合成された各配列がその後のランダム化および方向性進化の取り組みの理想的な出発点となることを保証します。

エラー耐性PCRのために単一の野生型遺伝子が必要な場合でも、DNAシャッフルのために複数の相同配列が必要な場合でも、Creative Enzymesは精度、柔軟性、そして下流の酵素進化プロセスとの完全な互換性を保証します。

遺伝子合成：変異導入のための信頼性の高い出発テンプレートの提供

酵素工学において、遺伝子合成は変異導入や組換えのための出発テンプレートを準備する際の好ましい方法として従来のクローニングに取って代わりました。合成生物学はDNA配列に対する正確な制御を可能にし、研究者がコドン使用を最適化し、問題のあるモチーフを排除し、効率的な発現と操作のために構造を標準化することを可能にします。

ランダム変異導入やDNAシャッフル実験を設計する際には、高品質な出発配列が不可欠です。未検証または不安定なDNA構造体は、隠れたエラー、二次構造の問題、または発現効率を低下させ、ライブラリ生成を妨げる希少コドンを含む可能性があります。合成遺伝子は、適切に最適化され検証されることで、これらの制限を克服し、発現と変異導入の成功率を最大化するクリーンでカスタマイズ可能なテンプレートを提供します。

クリエイティブエンザイムズは、バイオインフォマティクスに基づく配列最適化と最先端の合成化学を組み合わせ、正確で発現準備が整い、完全に文書化された合成遺伝子を提供します。したがって、当社の上流合成サービスは、堅牢な変異体ライブラリを生成し、信頼性の高いDNA再組換えを行うための重要な基盤を提供します。

図1. DNAシャッフルの図。まず、親の配列が酵素DNase Iによってランダムに断片化され、その後、断片がプライマーなしのPCRサイクルを繰り返すことで再構築される。クロスオーバーは、異なる親からの断片で構成された二本鎖に新しいヌクレオチドが追加される延長ステップ中に生成される。多くのサイクルの後、全長の配列が再構築される。(Moore, 2002)

私たちの提供内容：遺伝子合成

Creative Enzymesは、ランダム変異導入およびDNAシャッフルプロジェクトに特化したエンドツーエンドの遺伝子合成ソリューションを提供しています。私たちのアプローチは、計算最適化、高度な合成方法、厳格な品質管理を組み合わせて、卓越した信頼性を持つDNA構造を提供します。

サービスワークフロー

遺伝子最適化パラメータ

• コドン使用: 最適化されたため 大腸菌、 ピチア・パストリス、 バチルス属昆虫、または哺乳類の宿主。
• GC含量のバランス調整：安定した二次構造を最小限に抑え、PCRベースのランダム化を促進するように調整されました。
• モチーフ除去：隠れたスプライシング部位、繰り返し配列、およびパリンドローム配列の排除。
• 配列標準化：効率的な組換えを促進するためのホモログ遺伝子セットのアライメント最適化。

技術仕様

• 遺伝子の長さ：標準で最大10 kb、長い配列はリクエストに応じて利用可能です。
• 合成精度：≥99.999% フルレングスシーケンシングによって検証済み。
• クローニングベクター：pET、pYES、pBAD、pPICZ、カスタムベクターなど、幅広い選択肢があります。
• 成果物：プラスミドDNA（≥5 µg）、配列マップ、およびQCレポート。

品質保証

各合成構造物は次のように進行します：

• 分光光度法による純度試験 (A260/A280 ≥1.8)。
• フルレングスシーケンシング検証（サンガーまたはNGS）。
• 制限酵素消化分析（該当する場合）。
• リクエストに応じたオプションの表現テスト。

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なぜ私たちを選ぶのか

ケーススタディと成功事例

よくある質問

• 遺伝子合成は、ランダム変異導入やDNAシャッフルの前に重要ですか？

  合成遺伝子は配列の正確性を保証し、不要なモチーフを除去し、コドン使用を最適化します。これにより、発現失敗のリスクが低減し、変異導入効率が向上します。

• Q: 複数の相同遺伝子を合成して組換え研究を行うことはできますか？

  はい。私たちは、DNAシャッフルのために整列された相同遺伝子の合成を専門としており、互換性のある recombination junctions と高いクロスオーバー効率を確保しています。

• Q: シーケンスの忠実性をどのように確保しますか？

  A: 合成された各遺伝子は、納品前にフルレングスシーケンシング（サンガー法またはNGS）、内部コントロールの検証、および純度評価を受けます。

• Q: 合成のために自分の最適化された配列を提供できますか？

  A: もちろんです。あなたのデザインから合成することもできますし、下流の突然変異誘発ワークフローとの互換性を確保するための最適化をお手伝いすることもできます。

• Q: どのような配信形式を提供していますか？

  A: 我々は、注釈付きの配列マップと品質管理文書とともに、プラスミドDNA、凍結乾燥DNA、またはグリセロールストックを提供します。

• 合成プロセスにはどのくらいの時間がかかりますか？

  A: 一般的なターンアラウンドタイムは、遺伝子の長さと複雑さに応じて、10日から15営業日です。

• Q: どのホストシステムを最適化できますか？

  A: 幅広い宿主に対してコドン使用を最適化します。 大腸菌、 バチルス、 ピチア・パストリス昆虫細胞および哺乳類細胞。

• Q: 私の遺伝子配列は機密として保持されますか？

  A: はい。すべてのデータとシーケンスは厳格な機密保持契約の下で保護されています。クライアントは完全な所有権と知的財産権を保持します。