包接体の溶解

クリエイティブ酵素は、複数のカスタム酵素サービスを専門とするバイオテクノロジー企業です。私たちは、学術および産業プロジェクトのための酵素の生産と精製において数十年の経験を持っています。私たちのサービスは、何千人もの顧客から称賛を受けています。組換え酵素の最先端の精製戦略により、製品は短期間で高品質に提供され、ニーズに応じたものとなります。さらに、クリエイティブ酵素は、特別な要件がある場合には顧客と密接に協力することに意欲的です。

大腸菌は、組換え酵素の生産に最も広く使用されています。しかし、E. coliでの高レベルの発現は、しばしばインクルージョンボディとして不溶性の凝集体として酵素が蓄積される結果となります。インクルージョンボディの酵素は生物学的活性を欠いており、その機能を回復するためには溶解、再折りたたみ、および精製手順が必要です。最初のステップはインクルージョンボディの精製です。その後、不溶性の酵素ペレットは、塩酸グアニジンや尿素などのバッファーで洗浄できます。次に、洗浄されたインクルージョンボディは、強力な変性剤と特定の還元剤を含むバッファーに再懸濁され、インキュベートされます。一般的に、インクルージョンボディは、変性剤の高濃度と還元剤の使用によって溶解されます。溶解された酵素は、酸化剤の存在下で変性剤をゆっくりと除去することによって再折りたたまれます。高濃度のカオトロピック試薬を使用してインクルージョンボディから酵素を溶解すると、二次構造の喪失が生じ、酵素構造のランダムコイル形成と疎水性表面の露出が引き起こされます。溶解中の二次構造の喪失と、再折りたたみ中の変性酵素分子間の相互作用による凝集は、インクルージョンボディからの生物活性酵素の回収が不良である主な理由と考えられています。

図：融合タンパク質β-gal-インスリン鎖Aを生産するE. coli細胞の透過型電子顕微鏡写真（x17,500）。矢印は融合タンパク質の明確なインクルージョンボディを示しています。
参考文献：Mukhopadhyay, Asok. Biotreatment, ダウンストリームプロセッシングとモデリング。スプリンガー・ベルリン・ハイデルベルク、1997年。61-109。

クリエイティブ酵素は、従来の方法によるインクルージョンボディの溶解プロセスを簡素化するために、生化学および構造生物学の専門知識に依存しています。私たちの精製サービスは、複数の利点を提供します：

• 生物学的に活性で可溶性の酵素の高い収率
• 構造的完全性と正しい立体構造を持つターゲット酵素
• 独自の設計方法論
• 社内最適化された酵素生産プロトコル
• 優れた専門家による強力な顧客サポート
• 顧客のニーズに合わせたカスタマイズサービス

クリエイティブ酵素は、生物学的に活性な酵素をタイムリーかつ経済的に提供することを約束します。私たちの技術やサービスについての詳細は、お気軽にお問い合わせください。