免疫沈降による酵素精製

Creative Enzymes は、さまざまな業界の研究者を高品質な製品とサービスでサポートしています。私たちの独自の技術の10年以上の開発に基づき、幅広い選択肢のある信頼性の高い酵素精製サービスを提供しています。免疫沈降（IP）は、酵素および酵素複合体の分離に最も効率的な方法の一つです。私たちのサービスには、設計、標準操作、および品質検査が含まれます。

免疫沈降は、細胞溶解液、血清、組織均質物などの複雑なサンプルからターゲットタンパク質の少量を分離するための方法です。IPで使用される抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであり、興味のある酵素、特定の翻訳後修飾、またはタンパク質が過剰発現している場合はエピトープタグを認識することがあります。免疫沈降には広く使用されている3つの方法があります。

• 従来の（または古典的な）方法

従来の方法では、抗体が最初にターゲット酵素（抗原）を含むサンプルとインキュベートされます。抗原-抗体複合体が形成された後、それは通常は架橋されたアガロースであるプロテインAまたはプロテインGビーズに結合します。その後、ビーズとサンプルは遠心分離され、捕捉された免疫複合体がペレット化されます。しかし、この精製方法の問題点には、ターゲットタンパク質がIP抗体で汚染されること、高価なIP抗体の破壊、または小さな樹脂ペレットから上清をピペットで取り除く際に発生するサンプル損失が含まれます。さらに、抗原またはその相互作用パートナーが抗体の重鎖および軽鎖と類似の分子量を持つ場合、これらのバンドはSDS-PAGEで共移動するため、汚染が最も問題となります。

• 方向性親和性法

この方法では、抗体がプロテインAまたはGビーズにクロスリンクされ、ターゲット抗原に結合するために適切に方向付けられた永久的な親和性サポートが得られます。この方法は、抗体の量が不足している場合や高価な場合に好ましく使用されます。なぜなら、抗体:プロテインAまたはG樹脂を再利用できるからです。

• 直接親和性法

この方法では、抗体がアガロースビーズに直接結合され、リンカーやプロテインAまたはGの必要がなくなります。この方法は、プロテインAまたはGに強く結合しない抗体を使用する際に特に有益です。しかし、この直接親和性戦略は、ビーズ上の抗体のランダムな方向性を引き起こします。これにより、特定の条件下で抗体結合効率が低下する可能性があります。直接親和性法の利点は、エリュートされたフラクションが抗体の重鎖および軽鎖で汚染されず、樹脂を何度も再利用できることです。

図1: 免疫沈降マトリックスの準備戦略。

図2: 3つのIP方法の抗原結合効率の比較。

さまざまな要因が精製プロセスに影響を与える可能性があり、IP抗体のクラス、精製されたタンパク質の特性、ならびに抗体の入手可能性とコストが含まれます。Creative Enzymes は、これらの要因を十分に考慮しています。私たちは、精製プロセスを実行する前に精製戦略を評価し、各酵素に最も適したプロトコルが使用されることを確認します。私たちの技術チームは、適切な方法の確立と信頼性の高い操作の達成に熟練しており、精製サービスの高品質を保証します。このカスタムサービスは、あらゆるタイプの酵素アプリケーションにおける研究と商業化を加速させます。