タグ付けされた酵素のアフィニティカラムによる酵素精製

クリエイティブエンザイムズは、研究室の研究および産業用途向けに組換え酵素のカスタム生産を提供しています。酵素製造および分子生物学的技術における強力な技術的背景を持ち、純粋で安定した酵素を得るためのさまざまなポストプロダクションサービスも利用可能です。クリエイティブエンザイムズは、汚染のない酵素を用いたその後のアプリケーションを促進するための信頼性の高い精製サービスを提供しています。

親和性タグを組換えDNA技術と並行して使用することで、関心のあるタンパク質の容易な修飾が可能になり、効率的な同定、生産、および宿主系からの分離が実現します。しかし、タンパク質の不溶解性、構造、安定性、構造的柔軟性、低い精製収率、宿主細胞の毒性は、微生物宿主を使用して組換えタンパク質を発現させる際に解決しなければならない課題です。生産および精製効率のこれらの課題に対処するために、融合タグが組み込まれ、発現収率を増加させ、溶解性および天然の折りたたみを影響します。親和性技術と組み合わせた新しいタグは、精製収率を増加させ、プロテアーゼはタグの除去をもたらします。酵素精製で最も一般的に使用されるタグは、それぞれHis-tagとGST-tagです。タグ付けされた酵素は、親和性クロマトグラフィーによって分離されます。

• His-tag

His-tagは、ポリヒスチジン残基からなる短い親和性タグです。これは、固定化金属親和クロマトグラフィー（IMAC）による精製プロセスで広く使用される方法です。基本的な原理は、マトリックスに固定化された遷移金属イオンと特定のアミノ酸側鎖との相互作用です。ヒスチジンのイミダゾール環は電子供与体として機能し、固定化された遷移金属と配位結合を形成することができるため、相互作用は非常に強力です。粗酵素がマトリックスを通過すると、ヒスチジン残基を含む酵素がIMACカラムマトリックスに効率的に保持されます。クリエイティブエンザイムズでは、His-tagが多くの発現系からの酵素の精製に成功裏に使用されています。この精製アプローチは、単一の精製ステップで100倍の濃縮をもたらします。酵素の純度は高収率で最大95%に達することができます。

図：タグを含むプライマーを使用してターゲットタンパク質にHis-tagを追加するスキーム。

• GST-tag

グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）は、26 kDaのタンパク質です。これは、融合タンパク質の単一ステップ精製に利用されています。グルタチオンに特異的に結合し、セファロースマトリックスに結合するため、GST部分と融合した関心のある酵素は、精製プロセス中にカラムマトリックスに保持されます。穏やかで非変性条件下で、ターゲット酵素は、エリューションバッファに還元型グルタチオンを追加することで放出されることができます。クリエイティブエンザイムズは、GSTと融合したさまざまな酵素の成功した精製のための詳細なプロトコルを十分に開発し、最適化しています。私たちの精製プロセスは、融合タンパク質の溶解性を保持し、精製中に変性剤や穏やかな界面活性剤を回避します。

• 免疫親和性クロマトグラフィー（IAC）

IACの原理は、抗体と抗原の間の高い特異性を利用することです。IACは、酵素濃度が混合物中で非常に低い場合に、他のクロマトグラフィー法よりも優れています。抗体を適切な樹脂に結合させて親和性吸着剤を形成することで、発酵マトリックス内のターゲット酵素を効率的に分離および精製できます。強い親和性のため、エリューションプロセスが難しい場合がありますが、クリエイティブエンザイムズは効率的なエリューションを達成するための独自の技術を持っています。

タンパク質精製を達成するための不可欠なツールとして、親和性クロマトグラフィーは生物学研究で最も広く適用される方法です。クリエイティブエンザイムズは、信頼性の高い精製サービスを提供しています。精製された酵素は高い純度と安定性を持っています。私たちの目標は、サービスコストを増加させることなく最高の品質を達成することです。詳細やサービスのさらなる利点については、お問い合わせください。