エンドプロテイナーゼAsp-N

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エンドペプチダーゼ

エンドペプチダーゼは主としてタンパク質ポリペプチド鎖内部のペプチド結合に作用し、長鎖タンパク質を短いペプチド断片へ分解します。本プロテアーゼが要求する切断部位の特異性は、プロテアーゼの基質特異性と呼ばれます。プロテアーゼの基質特異性を利用することで、特定構造を有するペプチドを標的指向的に取得できます。

エンドペプチダーゼ

Endoproteinase Asp-Nは、Asp残基のアミノ末端側を特異的に加水分解するアスパラギン酸プロテアーゼであり、プロテオミクス解析において有望な応用が期待されます。Endoproteinase Asp-Nは亜鉛メタロエンドペプチダーゼで、高い特異性を有し、アスパラギン酸残基のN末端側のペプチド結合を切断し、より低頻度でグルタミン酸（E）残基も切断します。本酵素はPseudomonas fragiの変異株由来で、分子量は27 kDaです。亜鉛存在下でpH 4～9の範囲において最適活性を示し、変性条件下でも活性を保持します。Asp-Nプロテアーゼは、トリプシンなど他のプロテアーゼと併用することで、タンパク質消化の効率向上に利用できます。質量分析グレードのAsp-Nプロテアーゼは、ペプチドマッチング、タンパク質同定、溶液内（in-solution）およびゲル内（in-gel）消化、ならびにペプチドマスフィンガープリンティングに使用できます。製品の詳細は酵素ページをご参照ください。

由来

本Asp-Nは、Pseudomonas fragiの変異株由来の質量分析（MS）グレード亜鉛メタロプロテイナーゼであり、活性発現には微量の亜鉛を必要とします。Asp-Nは単独で、またはトリプシンもしくは他のプロテアーゼと並行して使用し、ペプチドマッピングおよびタンパク質シーケンシング用のタンパク質消化物を調製できます。Asp-Nプロテアーゼは、溶液内（in-solution）およびゲル内（in-gel）のいずれの消化ワークフローにも適しています。

特性

エンドプロテイナーゼAsp-Nは主に、アスパラギン酸残基およびシステイン残基の酸化により生じるシステイン酸残基のアミノ側で切断し、限られた数のペプチド断片を生成します。グルタミン酸残基でも切断が起こり得ますが、グルタミル残基での切断速度はアスパラギン酸残基での切断速度より有意に低くなります。AspNは37°Cで2～20時間の条件下でタンパク質を効率的に消化できます。AspNは、1M尿素、2M塩酸グアニジン、0.1% SDS、2% CHAPS、10%アセトニトリルなどの変性条件下でも活性を保持し、pH 6～8の範囲で最適活性を示します。本凍結乾燥酵素の分子量は27 kDaで、-20°Cで保管した場合、1年間安定です。