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放射測定酵素アッセイ

Creative Enzymes は、酵素活性測定において数年間にわたり最大の市場シェアを獲得しています。当社は、包括的な専門知識と先進的な設備を有し、お客様の研究に最適なサポートを提供します。プロフェッショナルなアッセイ手法と高品質な検査は、何千人もの科学者のニーズを満たしてきました。手法開発とデータ解析における強力な実績により、Creative Enzymes は迅速な納期で信頼性の高いカスタマイズサービスを提供できます。放射能酵素アッセイの需要増加に対応し、Creative Enzymes は酵素活性および動態解析のための標準化された放射能アッセイサービスを確立しました。

過去10年間で、放射能酵素アッセイの本来の感度、特異性、そして簡便さにより、その開発と応用は生化学の多くの分野で急速に拡大しました。放射能酵素アッセイは、放射性基質が放射性生成物に変換されることに基づいています。酵素反応速度は、反応混合物から分離後の生成物または残存基質の放射能を測定することで決定されます。基質と生成物を定量的に迅速に分離する簡便な方法の利用可能性は、放射能酵素アッセイの2つの主要要件の1つです。もう1つの要件は、既知の特定放射能を持つ適切な標識基質の利用可能性です。放射能酵素アッセイでは、基質は通常低い特定活性で使用され、正確に測定しやすいため、標識基質と生成物の定量的分離が酵素試験のポイントとなります。Creative Enzymes は迅速な抽出と分離に豊富な経験を持ち、正確な結果を保証します。

従来の比色法や分光光度法などの方法と比較して、放射能アッセイには多くの利点があります。まず、これら2つの方法とは異なり、放射能アッセイは反応溶媒、例えば強く着色された粗抽出物による干渉を受けません。また、放射性生成物のみを測定するため、生成物濃度が高い抽出物中でも酵素活性を測定できます。さらに、放射能アッセイの高感度により、より広範な基質濃度範囲で使用可能です。触媒化学反応の種類に基づき、酵素は6つのクラスに分類されます。放射能活性アッセイはすべてのクラスで利用できます。

この酵素群については、NAD、NADP、FAD、FMN などの大きなスペクトルシフトを持つ補酵素を利用するため、従来の分光法アッセイがよく研究されています。しかし、感度不足や混入酵素・内在性物質による干渉を避けるため、放射能法が用いられています。また、一部の反応は粗抽出物のみで研究されており、補因子や水素供与体・受容体の要件がまだ不明な場合もあります。こうした状況では、放射能アッセイ法が唯一の選択肢となります。

このクラスは酵素の中でも大きなグループであり、放射能法が広くアッセイに用いられています。例えば、メチルトランスフェラーゼの場合、メチル基に 14C またはトリチウムで標識した S-アデノシルメチオニンをメチル供与体として放射能アッセイに使用できます。アシル基転移酵素では、アシル標識アシル-CoA を基質として使用できます。

これらの酵素は、従来は生成した酸をpH滴定や重炭酸緩衝液からのCO2放出の測定によって主にアッセイされてきました。しかし、放射能アッセイは従来法よりも迅速、簡便、正確、かつ高感度であるため、多数の放射能アッセイ法が報告されています。

放射能アッセイは脱炭酸酵素のアッセイによく用いられます。カルボキシル基標識基質からの 14CO2 放出は、明白かつ最も頻繁に用いられる手法です。

この酵素クラスのアッセイには放射能法はあまり適用されていませんが、従来法よりもはるかに高感度かつ簡便であることが分かっています。

リガーゼ活性の測定にも放射能アッセイがよく用いられます。例えば、アミノアシルtRNA合成酵素は、アミノ酸と特異的な受容体tRNAからATP依存的にアミノアシルtRNAを生成します。これらの酵素は非常に特異的で、それぞれ1種類の天然アミノ酸にのみ特異的です。これらはほぼ例外なく放射能法でアッセイされています。

The reaction catalyzed by choline acetyltransferase using 14C-labeled acetyl-CoA as the substrate, an example of radiometric assay. 図: コリンアセチルトランスフェラーゼによる 14C 標識アセチルCoA を基質とした反応の例(放射能アッセイの一例)。

特定の操作に関連するいくつかの課題があるにもかかわらず、放射能アッセイは多くの分野で重要な手法となっています。これらの方法は、一般的な生化学だけでなく、特に遺伝性酵素欠損症による疾患の研究や診断において、臨床生化学でもますます有用になると予測されます。Creative Enzymes は常に酵素サービス業界への鋭い洞察を持ち、先端技術と緊急のニーズを的確に捉えています。当社の放射能酵素アッセイは、最高水準の品質と迅速な納期を誇ります。技術サポートやサービスに関するお問い合わせはお気軽にご連絡ください。


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