H-D-Phe-Pip-Arg-pNA酢酸塩

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番号

HDPG-001

説明

H-D-Phe-Pip-Arg-pNA酢酸塩は、トロンビンの天然基質であるフィブリノゲンAα鎖のN末端領域をモデルとして設計された発色性ペプチド基質です。

アプリケーション

トロンビンを用いたアンチトロンビン‐ヘパリン補因子（AT-III）の発色性測定。

外観

白色〜黄色の固体

製品概要

本基質はトロンビンに特異的であり、発色性基質を用いた分光光度法による検出に基づくAT-IIIアッセイに使用されます。本アッセイは、高感度で正確かつ実施が容易であるとされています。

フォーム

固形剤

CAS番号

115388-96-0

分子量

612.68

純度

99.81%

特異性

トロンビン

ストレージ

密封保管し、吸湿を避けてください。
粉末：-80℃で2年間、-20℃で1年間。
溶媒中：-80℃で6か月間、-20℃で1か月間。

準備手順

ストック溶液調製時の必要溶媒量ガイド：
1 mM：1 mg を 1.6322 mL；5 mg を 8.1609 mL；10 mg を 16.3217 mL。
5 mM：1 mg を 0.3264 mL；5 mg を 1.6322 mL；10 mg を 3.2643 mL。
10 mM：1 mg を 0.1632 mL；5 mg を 0.8161 mL；10 mg を 1.6322 mL。

溶解度データに基づき溶媒を選択してください。凍結融解の反復を回避するため、調製した溶液はアリコート分注してください。ストック溶液に水を使用する場合は、使用時に作業用濃度へ希釈した後、0.22 μm フィルターで滅菌ろ過してから使用してください。

機能

AT-III測定におけるトロンビン用発色性基質。

同義語

S-2238酢酸塩

ターゲット

トロンビン

分子式

C₂₉H₄₀N₈O₇

溶解度

DMSO：100 mg/mL（163.22 mM）；超音波処理が必要です。吸湿性のあるDMSOは溶解性に著しい影響を及ぼす可能性があるため、新規開封のDMSOを使用してください。
H₂O：≥ 100 mg/mL（163.22 mM）；飽和度は不明です。

インビトロ

ストック溶液の調製：
1. H-D-Phe-Pip-Arg-pNA acetate 25 mgを無菌蒸留水40 mLに溶解し、1.0 mmol/Lのストック溶液を調製する。
2. ストック溶液を分注し、遮光下、4℃で保存する。

作業溶液の調製：
1. ストック溶液7.5 mLを分取する。
2. 3 mg/mLポリブレン溶液1.0 mLを添加する。
3. 無菌蒸留水1.5 mLを添加する。
4. 十分に混和し、0.75 mMの作業溶液を調製する。
5. 4℃で保存する。作業溶液は1週間安定である。

AT-IIIアッセイ：
1. 被験血漿50 μLをヘパリン含有緩衝液3.50 mLで希釈する。
2. 希釈血漿400 μLを分取し、37℃で2～6分間プレインキュベートする。
3. 10 NIH U/mLトロンビン溶液100 μLを添加し、十分に混和する。
4. 正確に30秒後、あらかじめ37℃に予温した作業溶液300 μLを添加し、強く混和する。
5. さらに正確に30秒後、50%酢酸300 μLを添加して反応を直ちに停止する。
6. 測定まで反応混合液を遮光下で保持する。
7. 405 nmにおける吸光度を測定する。
8. 検量線を作成し、被験血漿中のAT-III濃度を算出する。
9. ブランク対照：正常血漿ブランク＝1.00 U/mL AT-III標準溶液400 μL＋50%酢酸300 μL＋蒸留水400 μL；被験血漿ブランク＝希釈被験血漿400 μL＋50%酢酸300 μL＋蒸留水400 μL。

インビボ

in vitro溶出法を用いて透明な原液（ストック溶液）を調製し、その後、共溶媒を順次添加する。in vivo用作業溶液は使用当日に新たに調製し、同日に使用すること。沈殿または相分離が生じた場合は、加温および／または超音波処理により溶解を補助してよい。

プロトコール1：10% DMSO＋40% PEG300＋5% Tween-80＋45% 生理食塩液。溶解度：≥ 2.5 mg/mL（4.08 mM）、透明溶液。1 mL調製時：25.0 mg/mLのDMSO原液100 μLをPEG300 400 μLに添加して混和し、Tween-80 50 μLを添加して混和する。続いて生理食塩液450 μLを添加し、全量を1 mLとする。生理食塩液の調製：塩化ナトリウム0.9 gをddH₂Oに溶解し、全量を100 mLにメスアップする。

プロトコール2：10% DMSO＋生理食塩液中20% SBE-β-CDの90%。溶解度：≥ 2.5 mg/mL（4.08 mM）、透明溶液。1 mL調製時：25.0 mg/mLのDMSO原液100 μLを、生理食塩液中20% SBE-β-CD 900 μLに添加して混和する。生理食塩液中20% SBE-β-CDの調製：SBE-β-CD 2 gを生理食塩液10 mLに溶解する。4°Cで保存し、保存期間は最長1週間とする。

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