NRBPは、線虫（C. elegans）、黒色線虫、マウスおよびヒトにおいて相同性を有する、進化的に保存されたタンパク質からなる新規ファミリーを代表する。COS-1細胞におけるNRBPの過剰発現は、JNK経路、p38経路、あるいはアクチン細胞骨格の再編成など、Rac3の想定される下流標的の活性化を誘導しない。さらに、NRBPはアクチン依存性ストレスファイバー、微小突起、または皮質下アクチンとの共局在を示さなかった。一方で、NRBPの過剰発現により、ゴルジ体関連マーカーp58が細胞内でより周辺部へ再分布する現象が多数認められ、これは小胞体からゴルジ体への輸送障害と整合する。免疫細胞化学により、NRBPと活性化Rac3が子宮内膜およびラメリポディアにおける細胞周辺部で共局在することが示された。これらの結果は、NRBPが細胞内輸送に関与し、Rhoファミリーの低分子量GTPアーゼとの相互作用を介して特定の細胞内局在へ標的化され得ることを示唆する。

序論

細胞内のシグナル伝達経路は多様なタンパク質により制御されている。その中でもアダプタータンパク質の一群は、制御過程において極めて重要な役割を担う。これらは特定のドメインやアミノ酸配列／モチーフを介して、シグナルタンパク質同士、あるいはシグナルタンパク質と脂質分子との結合を特異的に制御し、上流および下流のシグナル伝達経路を連結する機能を果たす。すなわち、連結および制御の観点から重要である。新規に同定されたタンパク質であるNRBP（nuclear receptor binding protein）は、ほとんどの正常ヒト組織に発現しており、胸腺で最も低く、精巣および胎盤で最も高い発現が認められる。NRBPは、293細胞およびHeLa細胞を含む15種類のヒト腫瘍細胞株でも検出されている。NRBPタンパク質は535アミノ酸から構成され、進化的に保存されており、複数の機能ドメインを含む。グルタミン酸およびセリンに富むN末端配列は、NRBPと他のSH2ドメイン含有タンパク質との結合を媒介する可能性がある。同時に、NRBPは2つの核内受容体結合ドメイン、核移行シグナル（NLS：nuclear localization signal）および核外輸送シグナル（NES）を有する核内受容体結合タンパク質である可能性も推定されている。現時点ではNRBPの機能に関する研究は限定的であるが、Rac3、Mlf1、NS3、Jab1などのタンパク質と結合し、関連機能を制御し得ることが報告されている。市販の抗NRBP抗体が存在しないため、遺伝子工学的手法により原核発現系でNRBP融合タンパク質を作製し、ヒトNRBPに対する特異的ポリクローナル抗体を作製・精製した。アダプタータンパク質NRBPの機能をさらに検討するための基盤を構築することを目的とした。

NRBPと疾患

がんや自己免疫疾患など多くのヒト疾患は、シグナル伝達経路と密接に関連している。細胞内シグナル伝達システムは、細胞増殖、神経活動、発生および分化、代謝、ならびに筋収縮を含む生命活動のあらゆる過程を制御し得る。リンカー（アダプター）タンパク質は複数のシグナル経路に関与し、シグナル伝達過程において代替不可能な重要タンパク質である。これらの研究は、より複雑な細胞内シグナルネットワークの理解を促進し、シグナル経路関連の創薬標的開発に必要な情報を提供する。ヒトNRBP遺伝子は染色体2p23領域に位置し、このバンドまたは隣接バンドの転座は腫瘍および造血系障害と密接に関連する。2002年にDe Langheらは、NRBPがRhoファミリーのRac3に結合し、NRBPの過剰発現が小胞体からゴルジ体へのゴルジマーカータンパク質p58の輸送を阻害し得ることを見出した。マウスMADMとヒトNRBPのアミノ酸配列相同性は98%にも達する。MADMは骨髄性白血病因子Mlf1と相互作用し、セリンキナーゼをリクルートしてMlf1をリン酸化し、Mlf1と重要タンパク質14-3-3ζとの結合を開始させることが示されている。単球におけるM期MADMの過剰発現は、Mlf1の細胞内分布を調節することにより、サイトカイン誘導性の細胞分化を制御し得る。同時に、我々の先行研究では、NRBPが転写活性化因子Jab1を介してTCR経路下流で重要な負の制御的役割を担う可能性を見出した。Jurkat T細胞においてNRBPを過剰発現させると、TCRまたはPMA誘導性の転写因子NFATおよびAP-1の活性が有意に抑制された。

参考文献

1. Hooper JD; et al. Cloning of the cDNA and localization of the gene encoding human NRBP, a ubiquitously expressed, multidomain putative adapter protein. Genomics. 2000, 66 (1): 113-8.