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肺炎球菌由来O-グリカナーゼ、組換え型

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番号
NATE-0496
略語
O-グリカナーゼ、組換え（肺炎球菌）
エイリアス
O-グリカナーゼ
ソース
E. coli
種
肺炎球菌
製品概要
酵素は、p-クロロ水銀ベンゼンスルホン酸のような硫ヒドリル試薬や、Mn2+やZn2+のような遷移金属によって不活性化されます。また、酵素は1 mM EDTAによっても阻害されます。高度に精製された形では、O-グリカナーゼはガラス表面に吸着し、不活性化されるか、変動する活性を示します。精製された基質を用いたアッセイはポリプロピレン容器で行うべきであり、ガラスピペットで酵素溶液を移すことは避けるべきです。精製された酵素は、調製された状態で2-8°Cで安定ですが、1回の凍結-解凍サイクルで約30%の活性が失われます。材料が室温で24時間保存される場合、酵素活性には大きな影響はありません。標準基質に対する酵素活性の最適バッファーは50 mMリン酸ナトリウム（pH 5.0）です。糖タンパク質の溶解性や活性要件のために最適でないpHでグリコシダーゼ処理が行われる場合、酵素活性の減少が予想されます。
フォーム
20 mM Tris-HCl、25 mM NaCl（pH 7.5）の無菌フィルター処理された溶液
アクティビティ
> 12 U/mg
分子量
~180 kDa ダルトン
純度
O-グリカナーゼは、汚染されるエンドおよびエキソグリコシダーゼ活性がありません。ツワイニングによって記載された方法に従い、酵素を0.2 mgのレゾルフィン標識カゼインと37°Cで約18時間インキュベートした後、プロテアーゼ活性は検出されませんでした。生産ホスト株は広範にテストされており、検出可能なグリコシダーゼを生成しません。
特異性
O-グリカナーゼは、糖タンパク質または糖ペプチドのセリンまたはスレオニン残基から、完全な二糖ユニットとしてGal β (1-3) GalNAc αを切断します。この二糖は、コア1型O-結合糖鎖の定義的な構造成分です。グリコシド結合の切断は、アルファ構成のGalNAc残基とポリペプチドのアミノ酸側鎖のヒドロキシル基の間で行われます。二糖コアのシアル酸やフコースのガラクトース-N-アセチルグルコサミンのラクトサミン繰り返し単位による置換は、加水分解を阻害し、オリゴ糖がタンパク質から解放されるのを防ぎます。コアI型構造を露出させてO-グリカナーゼの作用を受けやすくするためには、まずSialidase A/NANase IIIなどのグリコシダーゼで長いオリゴ糖を処理する必要があります。また、β (1-4)-ガラクトシダーゼとβ-N-アセチルヘキソサミニダーゼ/ヘキサーゼIの組み合わせでの処理も行います。この酵素は、タンパク質または炭水化物に結合した単一のα-GlcNAcに対しては活性を持ちません。合成基質アナログであるGal β (1-3) GalNAc-p-ニトロフェニルグリコシダーゼでは、Km値が約200 μMで得られました。興味深いことに、この酵素は他のグリコヒドロラーゼに似ており、「トランス」グリコシダーゼ活性を持つと報告されています。二糖ユニットの切断は、共有結合酵素中間体の形成によって媒介されます。酵素結合グリカンは、水との置換の代わりに、いくつかのヒドロキシル化された受容体分子に転送されることができます。
最適pH
最適: pH 5.0 範囲: pH 5.0-6.0
ストレージ
冷蔵パックで翌日配送されます。2-8°Cで保管してください。凍結しないでください。
バッファ
5倍反応バッファー 5.0 (250 mM ナトリウムリン酸塩, pH 5.0)
同義語
O-グリカナーゼ
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