ディスパーゼ

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紹介

ディスパーゼは、フィブロネクチン、コラーゲンIV、そしてやや少ない程度でコラーゲンIを切断するプロテアーゼです。いくつかの細菌に存在し、ポリミクサの培養濾液から分離することができます。抽出、精製され、研究に使用されます。特に胚性上皮細胞や間葉細胞の分離に有用です。ディスパーゼIIは、ロイシン-フェニルアラニン結合を切断するために特に使用されます。

特性

ディスパーゼは中性プロテアーゼであり、異なる組織や臓器からの細胞外マトリックスの消化に使用される非特異的メタロプロテアーゼです。ディスパーゼは、細胞培養における細胞収穫や接種移動にも使用できます。また、懸濁細胞培養における細胞の偶発的な塊を防ぐためにも使用されます。一般的に使用されるトリプシン、コラーゲナーゼ、ストレプターゼプロテアーゼはすべてタンパク質加水分解酵素であり、組織を分散させ、細胞を分離するために使用されますが、細胞に対して非常に有害であり、培養中の細胞を不安定にし、さらにはマイコプラズマ汚染を引き起こすことがあります。ディスパーゼは細胞膜を傷つけず、マイコプラズマや動物ウイルスを導入しません。温度、pH、血清成分などの違いはディスパーゼにほとんど影響を与えず、その活性は希釈によって大幅に低下し、後続の培養を容易にします。

酵素活性の定義

1Uは、アッセイ条件下で1分間に1μmolのチロシンに相当するFolin陽性アミノ酸またはペプチドを放出する酵素の量です。ディスパーゼ: ≥ 0.8 U/mg（37度、カゼインを基質として使用、pH 7.5）。

阻害剤: EDTA、EGTA、Hg²⁺。血清は酵素活性を阻害しません。

利点

• 酵素の迅速かつ効果的でありながら穏やかな作用。
• 細胞膜に損傷を与えずに細胞が無傷のままでいることができます。
• 酵素は細菌由来であり、マイコプラズマや動物ウイルスの汚染を含みません。
• 温度、pH、血清成分の変化に対して安定しています。
• キレート剤や希釈による簡単な不活化。

応用

• ディスパーゼは、接着性一次細胞を培養する際によく使用されます。この処理は、トリプシン消化よりも穏やかであることが判明しています。
• ディスパーゼはセリン-フェニルアラニンを消化できます。
• ディスパーゼの硝子体内注射は、異なる動物における増殖性硝子体網膜病変をモデル化するために使用できます。
• ディスパーゼは、マトリゲル基質上で成長した細胞を再利用できる中性メタロタンパク質加水分解酵素の一種です。さらに、ディスパーゼは組織分離にも使用できます。