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マイクロスケール熱泳動法(MST)を用いた酵素アッセイ

酵素産業の発展を見据えた先見的な視点のもと、Creative Enzymesは常に最新技術をいち早く取り入れてきた企業の一つです。酵素活性試験における強固な技術基盤により、当社は他のサービスプロバイダーと一線を画しています。当社チームは、集約型の先進的研究施設を中核に、幅広い専門性を有する研究者陣で構成されています。あらゆる試験ニーズに対応するため、信頼性の高い多様なアプローチを確立してきました。マイクロスケール熱泳動(Microscale Thermophoresis:MST)は、生体分子間相互作用を定量化するための新興技術です。さまざまなモデル系を用いることで、MSTの適用範囲には、結合量論および結合様式の決定、タンパク質アンフォールディングの解析、ならびに熱力学的解析が含まれます。Creative Enzymesでは主として酵素反応速度論への応用に注力しており、MSTを用いた優れた活性測定サービスを提供しています。

温度勾配に沿って分子が指向性をもって移動する「熱泳動」現象は、1856年にCarl Ludwigにより初めて記載されました。開発以降、マイクロスケール熱泳動(MST)は、タンパク質と低分子の相互作用をモニタリングする革新的手法として急速に普及しました。結合事象により誘起される分子のコンフォメーション、電荷、サイズのごく微小な変化であっても、熱泳動検出により捉えることで、生体分子相互作用の定量化を可能にします。したがって、MSTは、低分子のタンパク質への結合、基質の酵素への結合、あるいはリガンドのリポソームへの結合といった事象を検出できます。さらにMSTは、等温滴定型カロリメトリー(ITC)や表面プラズモン共鳴(SPR)などの代表的な非蛍光法と比較して、表面固定化を回避でき、かつ試料消費量が少ないという利点があります。加えて、MSTはほぼあらゆるバッファー条件下で実施可能であり、血漿や細胞溶解液中でも測定できます。近年の技術進歩により、トリプトファンを含有するタンパク質の固有蛍光を利用して熱泳動を追跡することも可能となり、標識不要かつ固定化不要の新規アプローチとして分子間相互作用の解析に活用されています。

生物医学研究において、MSTは酵素活性の測定における重要な手法となっています。MST試験の高い精度に加え、主な特長・利点は以下のとおりです。

他の酵素試験法と異なり、MSTではpM/nM濃度域での測定が可能であり、反応液量も少量(<4 µL)で十分です。

MST測定は短時間で完了します。測定対象の酵素はさまざまな溶液中に存在し得るため、測定前に目的酵素を精製する必要がなく、測定温度も任意に設定できます。

すでに、MSTを用いて酵素反応速度論を解析できることを示す例が報告されています。

異なるMSTベースのアプローチを用いたDNase IによるDNAの酵素分解の反応速度。(A)Mg2+依存的なDNase IによるDNA分解の模式図。(B)DNA分解のリアルタイム測定。 図: 異なるMSTベースのアプローチを用いたDNase IによるDNAの酵素分解の反応速度。(A)Mg2+依存的なDNase IによるDNA分解の模式図。(B)DNA分解のリアルタイム測定。

MST装置の精度が実験の要であり、その感度および再現性が結果の信頼性を左右することは明らかです。Creative Enzymesでは、最先端のMST装置を用いて酵素試験を実施し、高精度を担保しています。MSTに関する包括的な専門知識と熟練したオペレーションを組み合わせることで、お客様に高い満足をもたらすサービスを提供します。

Creative Enzymesは、先進的な技術および機器を用いた酵素活性の定量化手法の改良・最適化に取り組んでいます。費用対効果に優れたMSTアッセイとして、当社は最適な選択肢であると確信しています。本試験に関するご質問がございましたら、どうぞお気軽にお問い合わせください。


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